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1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文鞘內(nèi)注射IL-18中和抗體對大鼠嗎啡耐受形成的影響Theeffectofintrathecalinjectionofanti-ratInterleukins·-18antibodyonthedevelopmentofmorphinetoleranceinrats課題來源：國家自然科學(xué)基金資助項目(No30901399)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院舒銀莓艮孥偉彥麻醉學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士南京軍區(qū)南京總醫(yī)院2013年3月20日廣州碩士學(xué)位論文鞘內(nèi)注射白介素一18中和抗體對大鼠嗎啡耐受形成的影響碩士研究生：舒銀銀指導(dǎo)教師：
2、李偉彥摘要背景：嗎啡是臨床廣泛應(yīng)用的強(qiáng)效鎮(zhèn)痛藥，也是治療譬如慢性癌痛等多種慢性疼痛的最后選擇。但長期應(yīng)用嗎啡后其鎮(zhèn)痛作用逐漸減弱，即產(chǎn)生所謂的嗎啡耐受效應(yīng)。嗎啡的成癮性和耐受性迫使患者為獲得滿意的鎮(zhèn)痛效果而加大藥量，進(jìn)而更增加了嗎啡的副作用。因此探討嗎啡耐受的機(jī)制，有效地防治嗎啡耐受是基礎(chǔ)和臨床研究共同關(guān)注的一個熱點話題。嗎啡耐受的機(jī)制十分復(fù)雜，近年來研究人員對此做了大量研究。多項研究提示膠質(zhì)細(xì)胞活化，尤其是脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，與嗎啡耐受的發(fā)生密切相關(guān)。與神經(jīng)病理性疼痛研究結(jié)果相似，大量研究提示：抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化僅能預(yù)防嗎啡耐受的發(fā)生，卻不能緩解
3、已存在的嗎啡耐受。而非特異性膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑丙戊茶堿則既能預(yù)防嗎啡耐受的發(fā)生，也能緩解已存在的嗎啡耐受。據(jù)此推測嗎啡耐受可能是由脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的活化引起的，而星形膠質(zhì)細(xì)胞的持續(xù)活化則對嗎啡耐受起到了維持作用。2008年Miyoshi等研究發(fā)現(xiàn)脊髓中IL—18介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞與脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用能夠增強(qiáng)神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛。IL．18主要在小膠質(zhì)細(xì)I摘要胞中表達(dá)，而IL一18R則主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。IL．18介導(dǎo)脊髓中小膠質(zhì)細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用的機(jī)制是：神經(jīng)病理性損傷發(fā)生后，TLR4被激活并通過MAPKp38信號通路引發(fā)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，通
4、過TLR4／MAPKp38通路激活的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL．18到胞外，并通過旁分泌的方式作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞上的IL一18＆IL一18與IL．18R的特異性結(jié)合增強(qiáng)了星形膠質(zhì)細(xì)胞中NF．r,B的磷酸化，導(dǎo)致了GFAP的上調(diào)，并且IL一18R的激活對星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL．18R的表達(dá)起到了正調(diào)節(jié)作用。生成的IL一18或其他細(xì)胞因子又可以通過自分泌或旁分泌的方式刺激小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)而引起更多的促炎性細(xì)胞因子(如IL—lD，IL一6，TNF—a)、環(huán)氧化酶2(COX-2)以及一氧化氮合酶(NOS)的生成，膠質(zhì)細(xì)胞生成的這些促炎因子還可以作用于脊髓背角神經(jīng)元，進(jìn)而引
5、起另一系列反應(yīng)。Miyoshi等的實驗表明L5脊神經(jīng)結(jié)扎后脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)IL—18明顯增加，TLR4／MAPKp38通路促進(jìn)了IL．18的釋放：而L5脊神經(jīng)結(jié)扎后脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)IL—18受體亦明顯增加，阻斷IL一18或IL—18受體信號，能明顯減輕神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的觸覺過敏，并抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的表達(dá)，及NF．r．B的磷酸化。實驗表明神經(jīng)損傷能夠分別誘發(fā)脊髓背角中小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞中IL．18和IL．18R的增加，而IL．18介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用對于通過神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的特定信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)引起的痛覺過敏的發(fā)展與維持起著決定性作
6、用。IL．18是IL．1家族成員，與IL—lp有很多相似之處，而IL一1p在嗎啡耐受中的作用早已明了，Shavit等研究發(fā)現(xiàn)慢性嗎啡耐受能夠引起IL．1B釋放增多。由于導(dǎo)致嗎啡耐受和神經(jīng)病理性疼痛的分子機(jī)制有著眾多的相似性，實驗證實脊髓中IL．18介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞與脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用能夠增強(qiáng)神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛，我們推測它可能也參與了嗎啡耐受的形成。即小膠質(zhì)細(xì)胞活化并釋放的IL—18，作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞表面的IL．18受體，導(dǎo)致了星形Ⅱ碩士學(xué)位論文膠質(zhì)細(xì)胞的活化，嗎啡耐受的維持。阻斷脊髓內(nèi)IL．18信號，可能為嗎啡耐受的防治提供一條新的途徑。基于這個
7、假設(shè)，本實驗通過鞘內(nèi)給予特異性的IL一18中和抗體，阻斷脊髓IL．18信號傳導(dǎo)，探討其對大鼠皮下注射嗎啡誘導(dǎo)的嗎啡耐受形成的影響，并分析其可能的作用機(jī)制，為防治嗎啡耐受提供一條新的思路和科學(xué)的理論依據(jù)。目的：觀察選擇性阻斷脊髓IL一18信號對皮下注射嗎啡誘導(dǎo)的慢性嗎啡耐受的影響，明確IL．18信號在慢性嗎啡耐受中的作用，為防治嗎啡耐受提供新的思路和科學(xué)的理論依據(jù)。方法：雄性SD大鼠50只，用改良的的Yaksh法進(jìn)行鞘內(nèi)置管，建立鞘內(nèi)置管模型。具體操作為大鼠腹腔注射2％戊巴比妥鈉60mg·kg。1麻醉后，大鼠取俯臥位，置于動物手術(shù)臺上，將大鼠腰部墊高，摸清兩側(cè)髂嵴，
8、其連線與棘
