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1、廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文弓背青鳉線粒體DNA遺傳多樣性分析摘要弓背青鳉（Oryziascurvinotus）隸屬怪頜鳉科（Adrianichthyidae）,青鳉屬（Oryzias），是一種廣鹽性、廣溫性、產(chǎn)卵量大、世代周期短及易于在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的小型魚(yú)類。弓背青鳉（O.curvinotus）是南方沿海分布的土著魚(yú)類，與同屬中研究最為清晰的日本青鳉（Oryziaslatipes）親緣關(guān)系密切，且都具有XX-XY性別控制系統(tǒng)，具有極好的理論研究?jī)r(jià)值。對(duì)弓背青鳉（O.curvinotus）生態(tài)學(xué)調(diào)查及其線粒體DNA遺傳多樣性分析，豐富了其生物學(xué)背景研究，為發(fā)展弓
2、背青鳉（O.curvinotus）為模式生物的研究提供支撐。具體研究結(jié)果主要包括五部分：1.弓背青鳉（O.curvinotus）的生態(tài)學(xué)調(diào)查水的理化指標(biāo)：鹽度范圍為0.14-33.57；水溫范圍為9.58-40.9℃；pH值范圍為7.2-9.38；溶解氧的范圍為2.11-17.12ppm。弓背青鳉（O.curvinotus）棲息生境特征是：生活在水流平緩并有植物的水域中，一旦食蚊魚(yú)（Gambusiaaffinis）發(fā)展成為優(yōu)勢(shì)種，弓背青鳉（O.curvinotus）的數(shù)量將大大減少。2.鹽度對(duì)弓背青鳉（O.curvinotus）受精卵孵化的影響粵西高橋地區(qū)
3、弓背青鳉（O.curvinotus）的受精卵在淡水到45鹽度范圍內(nèi)均可孵化，在25鹽度時(shí)，受精卵的孵化率最高；在20鹽度時(shí)，受精卵的孵化周期、培育周期均最長(zhǎng)，而低鹽度（0-10）和高鹽度（40-45）周期相對(duì)較短。3.弓背青鳉（O.curvinotus）遺傳性別鑒定開(kāi)發(fā)了1對(duì)可以快速、準(zhǔn)確鑒定弓背青鳉（O.curvinotus）遺傳性別的引物，該對(duì)引物通過(guò)PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳可以判定檢測(cè)個(gè)體的遺傳性別，雄性個(gè)體（XY）可以擴(kuò)增出959bp和656bp2條條帶，而雌性個(gè)體（XX）只能擴(kuò)增出1條656bp條帶。4.弓背青鳉（O.curvinotus）線粒
4、體基因組全序列測(cè)定與系統(tǒng)進(jìn)化分析測(cè)定并注釋了弓背青鳉（O.curvinotus）線粒體基因組全序列，結(jié)果表明，弓背青鳉（O.curvinotus）線粒體基因組序列全長(zhǎng)為16676bp，基因排列和構(gòu)成與其他硬骨魚(yú)大體一致，包含37個(gè)基因和1個(gè)控制區(qū)。13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因，除了COⅠ基因以GTG為起始密碼子外，其余編碼蛋白基因均以ATG為起始密碼子。22個(gè)tRNA基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)均呈典型的三葉草狀?；?種青鳉屬（Oryzias）魚(yú)類線粒體基因組全序列構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)表明，弓背青鳉（O.curvinotus）與呂宋青鳉（Oryziasluzonensis）的親緣關(guān)系
5、比較近。5.基于COⅠ基因與D-loop區(qū)的南方沿海弓背青鳉（O.curvinotus）遺傳多樣性I弓背青鳉線粒體DNA遺傳多樣性分析分析基于mtDNACOⅠ基因分析結(jié)果：136條COⅠ基因序列（579bp）中，共發(fā)現(xiàn)77個(gè)變異位點(diǎn)，堿基轉(zhuǎn)換/顛換比值（TS/TV）為5.42；平均核苷酸差異數(shù)、核苷酸多樣性、單倍型多樣性及單倍型數(shù)分別為9.709、0.01677、0.967、52；AMOVA分析揭示遺傳差異主要發(fā)生在群體間；基于COⅠ基因序列構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)絕大多數(shù)個(gè)體按照采樣點(diǎn)進(jìn)行聚類。基于mtDNAD-loop分析結(jié)果:141條D-loop區(qū)序列（507b
6、p）中，共檢測(cè)到37個(gè)變異位點(diǎn)，堿基轉(zhuǎn)換/顛換比值（TS/TV）為2.79；平均核苷酸差異數(shù)、核苷酸多樣性、單倍型多樣性及單倍型數(shù)分別為2.923、0.00577、0.911、29；AMOVA分析揭示遺傳差異主要發(fā)生在群體間；基于D-loop區(qū)構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)，多數(shù)個(gè)體沒(méi)能按照采樣點(diǎn)進(jìn)行聚類。研究表明，弓背青鳉（O.curvinotus）線粒體COⅠ基因比D-loop區(qū)具有更多的信息位點(diǎn)，更適合用于弓背青鳉（O.curvinotus）的遺傳多樣性研究。根據(jù)COⅠ基因和D-loop區(qū)序列檢測(cè)群體遺傳多樣性的結(jié)果，南方沿海弓背青鳉（O.curvinotus）群體的
7、遺傳多樣性高，群體經(jīng)歷過(guò)群體擴(kuò)張事件，遺傳結(jié)構(gòu)分化明顯，因此需要?jiǎng)澏ūＷo(hù)單元。關(guān)鍵詞：弓背青鳉；線粒體；遺傳多樣性II廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文GeneticDiversityAnalysisofMitochondrialDNAinOryziascurvinotusAbstractOryziascurvinotusbelongstotheorderofAdrianichthyidae,Oryzias,whichisbroad-salinity,widetemperature,strongtolerancetohypoxia,largeamountofeggs
8、laid,shortgenerationcycles,andeas
