副溶血性弧菌耐藥性微進(jìn)化機制初步研究.pdf

《副溶血性弧菌耐藥性微進(jìn)化機制初步研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號：M150208419上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：副溶血性弧菌耐藥性微進(jìn)化機制初步研究Preliminaryresearchonmicroevolution英文題目：mechanismsofantimicrobialresistanceofVibrioparahaemolyticus專業(yè)：食品科學(xué)與工程研究方向：細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生與進(jìn)化機制姓名：李歡指導(dǎo)教師：趙勇教授二O一八年五月二十日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本

2、人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影

3、印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注答辯地點答辯日期上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文副溶血性弧菌耐藥性微進(jìn)化機制初步研究摘要副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)作為一種常見的食源性致病菌，其引起的食物中毒事件在世界各地頻繁發(fā)生，且已被視為全球范圍內(nèi)腹瀉類疾病暴發(fā)的主要原因之一。副溶血性弧菌耐

4、藥性問題已引起人們的高度關(guān)注，但對副溶血性弧菌耐藥性發(fā)生微進(jìn)化的原因暫未有詳解。全基因組測序技術(shù)的應(yīng)用，有助于監(jiān)測抗生素耐藥性的出現(xiàn)和傳播，可預(yù)測微生物潛在的耐藥機制，進(jìn)一步探明細(xì)菌獲得耐藥性的原因，在疾病的診斷、治療、新藥物的研發(fā)中發(fā)揮巨大的作用。因此，為清楚了解副溶血性弧菌耐藥性微進(jìn)化的機制，本文進(jìn)行了如下的研究工作：（1）食品與臨床分離的致病性副溶血性弧菌耐藥性研究；（2）一種誘導(dǎo)副溶血性弧菌產(chǎn)生左氧氟沙星耐藥性的方法；（3）敏感型與獲得耐藥型的副溶血性弧菌生物性狀變化研究；（4）全基因組測序追蹤副溶血

5、性弧菌的耐藥性微進(jìn)化機制。本研究的主要研究內(nèi)容和研究結(jié)果如下：1.食品與臨床分離的致病性副溶血性弧菌耐藥性研究探究食品與臨床分離的致病性副溶血性弧菌耐藥性差異，為副溶血性弧菌耐藥機制的研究提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。運用K-B紙片法，對上海市46株不同來源的致病性副溶血性弧菌（28株臨床菌株、18株食品源菌株）進(jìn)行耐藥性監(jiān)測，并通過PCR技術(shù)分析菌株的耐藥基因攜帶情況。進(jìn)一步利用多位點測序技術(shù)揭示46株副溶血性弧菌的遺傳多樣性，針對相同進(jìn)化分支中不同來源的分離株進(jìn)行耐藥性比較。結(jié)果顯示28株臨床菌株的耐藥率（100%）明顯

6、高于18株食品源分離株（88.9%），其中，臨床菌株全部為多重耐藥性菌株（n=28），而食品源中僅有2株存在多重耐藥性現(xiàn)象。耐藥基因分析結(jié)果顯示：對比于食品源分離菌株，臨床菌株所攜帶的耐藥基因數(shù)量更多，種類也更為豐富。多位點測序分型結(jié)果也顯示出相同的趨勢，即在同一進(jìn)化分支中，臨床菌株的耐藥性也顯著高于食品分離株。本研究首次系統(tǒng)地比較了食品與臨床分離的致病性副溶血性弧菌耐藥表型與耐藥基因型的差異，并從微進(jìn)化的角度初步分析了其耐藥性形成的原因，為副溶血性弧菌耐藥性的起源、傳播與控制提供可靠的數(shù)據(jù)支持。2.一種誘導(dǎo)

7、副溶血性弧菌產(chǎn)生左氧氟沙星耐藥性的方法I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文本研究建立了一種快速誘導(dǎo)副溶血性弧菌產(chǎn)生左氧氟沙星耐藥性的方法。主要步驟如下：1.敏感菌株篩選：通過肉湯倍數(shù)稀釋法，確定左氧氟沙星抑制敏感型菌株的最低抑菌濃度（MIC），篩選出左氧氟沙星敏感型的副溶血性弧菌菌株。2.亞致死抗生素濃度初步誘導(dǎo)：對1/2MIC中可生長的敏感型菌株的菌液處理后，接種于含有不同濃度抗生素的96孔板中培養(yǎng)。3.亞致死抗生素濃度連續(xù)誘導(dǎo)：重復(fù)該方法，使該菌株持續(xù)存在于亞致死的抗生素濃度條件下生長，直至副溶血性弧菌產(chǎn)生左氧氟沙

8、星的耐藥性，即其MIC值達(dá)到CLSI規(guī)定的耐藥標(biāo)準(zhǔn)。4.耐藥性菌株的保藏：對誘導(dǎo)后培養(yǎng)至9LogCFU/mL的突變株進(jìn)行菌種保藏。5.獲得耐藥性的驗證：將保藏的突變菌株重新活化，連續(xù)傳代培養(yǎng)5天，并用兩種不同的藥敏試驗方法檢測突變株的耐藥性，以確定該突變株獲得了能夠穩(wěn)定遺傳的耐藥性。結(jié)果顯示，誘導(dǎo)后的副溶血性弧菌獲得了左氧氟沙星耐藥性，其MIC值均達(dá)到了CLSI的耐藥標(biāo)準(zhǔn)，并且這種耐藥性能夠穩(wěn)定地遺