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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號：M150101087上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文縊蟶多巴胺受體基因的克隆、表達(dá)及題目：其在免疫和幼蟲發(fā)育中的功能初探Cloning,expressionandfunctioninimmune英文題目：andlarvaldevelopmentofdopaminereceptorgeneinSinonovaculaconstricta專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：貝類種質(zhì)資源與遺傳育種姓名：杜蘊(yùn)超指導(dǎo)教師：牛東紅教授，李家樂教授二O一八年四月上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)
2、位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手
3、段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注答辯地點(diǎn)答辯日期上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文縊蟶多巴胺受體基因的克隆、表達(dá)及其在免疫和幼蟲發(fā)育中的功能初探摘要縊蟶（Sinonovaculaconstricta）是我國重要的經(jīng)濟(jì)貝類，具有良好的發(fā)展前景?？O蟶的養(yǎng)殖先在南方興起，而后由南到北發(fā)展，因其肉質(zhì)鮮美，成為我國重要的經(jīng)濟(jì)貝類。多巴胺受體作為神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)受體，為國內(nèi)外學(xué)者所關(guān)注。多巴胺受
4、體在感覺、運(yùn)動、免疫、攝食、生長發(fā)育等生物學(xué)過程中都是重要的調(diào)節(jié)者和參與者。本研究通過RACE技術(shù)克隆得到縊蟶兩個多巴胺受體基因，分析了基因的序列特征和時空表達(dá)特征；通過抑制劑篩選實驗，基于多巴胺受體的藥理學(xué)特征鑒定出多巴胺受體類型，并篩選出適合縊蟶D2類多巴胺受體的抑制劑和作用濃度。探究了多巴胺受體在損傷修復(fù)中的作用，基于篩選出的抑制劑探究鰻弧菌感染之后的免疫應(yīng)答反應(yīng)，并檢測超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)和過氧化氫酶（Catalase，CAT）的含量變化，初步探究了D2類受體在縊蟶幼蟲發(fā)育階段中的作用。具體
5、的研究成果如下：1縊蟶多巴胺受體的克隆及其選擇性多聚腺苷酸化（alternativepolyadenylation，APA）變異體從縊蟶轉(zhuǎn)錄組中得到兩個多巴胺受體的基因片段ScDopR1和ScDopR2，經(jīng)過RACE克隆獲得兩個基因的cDNA全長，ScDopR2-1基因全長2216bp，包含5’UTR區(qū)171bp，ORF區(qū)1814bp，3’UTR區(qū)231bp，共編碼597個氨基酸殘基；ScDopR2-2基因發(fā)現(xiàn)兩個可變多聚腺苷酸化變異體，包含相同的ORF區(qū)和5’UTR區(qū)，ORF區(qū)長1440bp，編碼479個氨基酸殘基，5’UTR區(qū)長34bp，
6、兩個變異體的區(qū)別在于3’UTR區(qū)域的長短，ScDopR2-2b基因在polyA尾前比ScDopR2-2a基因多出了960bp，ScDopR2-2a變異體cDNA全長1824bp，ScDopR2-2b變異體cDNA全長2758bp?；蛐蛄刑卣鞯姆治龊凸δ苡虻念A(yù)測結(jié)果顯示，兩個受體均具備G蛋白偶聯(lián)受體的典型結(jié)構(gòu)域，以及具有較長的第三胞內(nèi)環(huán)以及較短的C-末端，基于D2類受體的結(jié)構(gòu)特征，初步推測兩個多巴胺受體均為D2類多巴胺受體。I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文2縊蟶多巴胺受體的時空表達(dá)特征分析利用熒光定量PCR檢測了多巴胺受體在縊蟶成體組織的表達(dá)情況，
7、結(jié)果表明，兩個基因在斧足、肝、鰓、水管、唇瓣、外套膜、性腺中均有表達(dá)，ScDopR2-1在水管和唇瓣中的表達(dá)量最高，在斧足、鰓和外套膜中的表達(dá)量次之，在肝和性腺中的表達(dá)量最低。ScDopR2-2基因同源區(qū)段和ScDopR2-2b基因的表達(dá)模式基本相同，表達(dá)量最高的組織均為水管，在水管、鰓、斧足中的表達(dá)量顯著高于其他組織。ScDopR2-2基因同源區(qū)段與ScDopR2-2b相比，組織的表達(dá)量也存在差異性，ScDopR2-2基因同源區(qū)段的表達(dá)量在鰓中高于斧足，而ScDopR2-2b基因在鰓中的表達(dá)與斧足的大致相同。多巴胺受體在縊蟶早期發(fā)育階段的檢
8、測結(jié)果表明，ScDopR2-1基因在匍匐期表達(dá)量最高，在D型期表達(dá)量次之，在這兩個時期出現(xiàn)兩個表達(dá)量峰值，呈現(xiàn)出先增加再減少再增加再減少的表達(dá)模式。而ScDopR2
