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1、HEREDITAS(Beijing)2007年1月,29(1):97―102ISSN0253-9772www.chinagene.cn研究報告DOI:10.1360/yc-007-0097轉(zhuǎn)病毒來源發(fā)夾RNA小麥表現(xiàn)對大麥黃矮病毒的抗性燕飛,張文蔚,肖紅,李世訪,成卓敏中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室,北京100094摘要:將大麥黃矮病毒GPV株系的復(fù)制酶基因片段和CP基因片段構(gòu)建成可在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)含有雙鏈復(fù)制酶RNA(莖)和反義CPRNA(環(huán))的復(fù)合發(fā)夾RNA結(jié)構(gòu),希望能
2、夠誘發(fā)植物體針對病毒的RNA干擾作用,從而達(dá)到抗病毒目的。利用基因槍法將該結(jié)構(gòu)導(dǎo)入小麥幼胚愈傷組織細(xì)胞后,通過在幼苗再生階段進(jìn)行以葉片為模板的快速PCR來加速陽性植株的篩選過程,最終共獲得基因組整合有外源基因的小麥再生植株21株。對再生植株接種不同劑量的病毒,其中9株對BYDV-GPV有低度抗性,表現(xiàn)在低接毒量時無癥狀,接毒量提高時發(fā)病且嚴(yán)重;6株具中度抗性,表現(xiàn)在低接毒量時無癥狀,接毒量提高時局部有不嚴(yán)重癥狀;6株具高度抗性,兩種情況下均無癥狀?？剐詫嶒灲Y(jié)果表明,hpRNA介導(dǎo)對BYDV的抗性可能受
3、到BYDV含量的影響,具有劑量效應(yīng)的特點。關(guān)鍵詞:發(fā)夾RNA;RNA干擾;大麥黃矮病毒;轉(zhuǎn)基因;小麥Transgenicwheatexpressingvirus-derivedhairpinRNAisresistanttoBarleyyellowdwarfvirusYANFei,ZHANGWen-Wei,XIAOHong,LIShi-Fang,CHENGZhuo-MinStateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests,Institute
4、ofPlantProtection,ChineseAcademyofAgriculturalSci-ence,Beijing100094,ChinaAbstract:AnexpressionvectorexpectedtoinduceRNAinterferenceagainstBarleyyellowdwarfvirus(BYDV),whichexpressedacompositehpRNAwiththedsRNAstemhomologousofBYDVGPVreplicasegeneandthean
5、tisenseRNAloophomologousofcoatproteingene,wasdesignedwithoutmarkergene.Thevectorwastransferredintocalluscellsfromwheat(TriticumaestivumL.)immatureembryosbyparticlebombardment.Toselectthepositivetransformantsasearlyaspossible,arapidPCR,whichdoesnotneedex
6、tractwheatDNAinsteadoffewleaves,wasusedatregenerationstageofplantlets.Totally21plantsprovedtocontainaliensequence.Antivirustestwithhighdoseinfectedvirusrevealedthat,9plantsshowedlowlevelofresistancetoBVDV,6plantsshowedmoderateresistanceand6plantsshowedh
7、ighlevelofresistance.Interestingly,bothlowandmoderatelevelsofresistanceplantswerenosymptomswheninfectedbyvirusesatlowdose.Itsuggeststhedose-dependenteffectoftheresistancemediatedbyhpRNAtoBYDV-GPV.Keywords:hairpinRNA;RNAinterference;Barleyyellowdwarfviru
8、s;transgenic;wheatRNA干擾(RNAinterference,RNAi)是多種生物nt)的小干擾RNA(smallinterferingRNA或shortin-體內(nèi)由雙鏈RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介導(dǎo)terferingRNA,siRNA)。siRNA與蛋白復(fù)合物結(jié)合后的同源mRNA降解現(xiàn)象。在細(xì)胞中,長的dsRNA被類形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-in-ducedsilencing似RNaseⅢ的Di
