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《豬骨免疫活性肽的酶解工藝及其分離純化的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)StudentID$20114102SichuanAgriculturalUniversityDissertationforMasterDegreeThestudyonenzymaticprocessofpigboneI。mmunepeptidesandtheirseparation廠7’乞engztlenDirectedbyProf．LiChengAgriculturalProductProcessingandStorageEngineeringYa’anSichuanJune2014萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所皇交的學位論文是我個
2、人在導師指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，學位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。一躲、韶哆沙l釤年關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明勇多日本人完全了解IⅡt)wl農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學可
3、以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容?！瘫菊撐牟槐Ｃ??？诒菊撐谋Ｃ?，‘在』解密后適用本授權(quán)。(請在以上口內(nèi)戈0“√”)研究生簽名：導師簽名：、髫畋／。。fy年f5月／弓日彥∥鋤夕日九．^7萬方數(shù)據(jù)摘要本論文以鮮豬骨為原料，通過木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和Alcalase堿性蛋白酶等三種酶制備豬骨蛋白酶解產(chǎn)物，以小鼠脾淋巴細胞的增殖率為主要指標，參考水解度，根據(jù)單因素和正交試驗優(yōu)化酶解條件；對在最佳酶解條件下得到的豬骨蛋白酶解產(chǎn)物，通過超濾、凝膠過濾層析以及離子交換層析等分離純化技術(shù)進行分離純化以制備出免疫活性肽。主要研究結(jié)果如下：木瓜蛋
4、白酶的水解最佳條件為：時間4h、pH值5．5、酶底比7000U／g、溫度55℃、底物濃度6％，此時脾細胞增殖率為79。50％，水解度為18．25％；胰蛋白酶的水解最佳條件為：時間5h、pH值7．5、酶底比5000U／g、溫度50。C、底物濃度6％，此時脾細胞增殖率為67．14％，水解度為21．25％；Alcalase堿性蛋白酶的水解最佳條件為：時間4h、pH值9．5、酶底比6000U／g、溫度45℃、底物濃度6％，此時脾細胞增殖率為98．41％，水解度為16．82％。Alcalase堿性蛋白酶酶解后的產(chǎn)物脾細胞增殖率最高。豬骨蛋白酶解液采用截流分子量分
5、別為2Ku、3Ku、5Ku、10Ku的超濾離心管進行分離，分離后得到的分子量分別為>10Ku、5Ku10Ku、3Ku"-'5Ku、2Ku'～3Ku和<2Ku的5個肽段的組分，其中，分子量<2Ku的肽段組分的脾細胞增殖率最高，其增殖率為100．89％。對超濾離心后分子量<2Ku的肽段組分首先采用凝膠過濾層析接著再進行離子交換層析分離，其分離結(jié)果顯示：豬骨蛋白酶解液通過凝膠過濾層析之后被分為4個分離峰(即4個組分)，其中第2組分對小鼠脾淋巴細胞的增殖率最高，且劑量關(guān)系最明顯，當濃度在1001．tg／mL時，脾淋巴細胞的增殖率為109．83％。第2組分經(jīng)離子
6、交換層析后被分成了9個峰(即9個組分)，其中第4組分增殖活性最強，且劑量關(guān)系最明顯，當濃度在10099／mL時，脾淋巴細胞的增殖率為114．30％。對超濾后分子量<2Ku的肽段組分首先使用離子交換層析接著再進行凝膠過濾層析分離，其分離結(jié)果顯示：豬骨蛋白酶解產(chǎn)物通過離子交換層析后被分成了8個峰(即8個組分)，其中第5組分增殖活性最強，且劑量關(guān)系最明顯，當濃度在10099／mL時，脾淋巴細胞的增殖率為107．97％。第5組分經(jīng)凝膠過濾層析后被分為5個峰(即5個組分)，其中第3組分增殖活性最強，且劑量關(guān)系最明顯，當濃度在10099／mL時，脾淋巴細胞的增殖率
7、為“O．95％。通過比較兩種分離純化方法對豬骨蛋白酶解液的分離效果，可以確定最佳的分離純化方法為：豬骨蛋白的酶解產(chǎn)物首先進行超濾分離，然后再進行凝膠過濾層析分離，萬方數(shù)據(jù)最后進行離子交換層析分離。分離得到的免疫活性肽對小鼠脾細胞增殖率為114．30％。關(guān)鍵詞：豬骨蛋白；酶解；免疫活性肽：分離純化萬方數(shù)據(jù)AbstractFreshpigbonewereenzymolyzedbytrypsin，papainorAlcalasetOobtaincollagenpeptides．Theproliferationofspleenlymphocyteinmouse
8、wereselectedasanmainindicator,Referencingthedeg
