竹根七抗腫瘤藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

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1、陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，無抄襲及編造行為。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果并由本人所承擔(dān)的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名么雄日期：如，孕年，月z拍關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明陜西中醫(yī)學(xué)院有權(quán)保留使用本人學(xué)位論文，同意學(xué)院按規(guī)定向國家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)陜西

2、中醫(yī)學(xué)院可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文?？梢怨?包括刊登)論文的全部或部分內(nèi)容。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽論文導(dǎo)師簽日期：硼件年r月z彳日日期：加心年r月2羅日摘要㈣㈣IIIIl洲㈣吣IlIlIIIIII㈣㈣Y2617311竹根七為百合科開口箭屬植物開口箭(聊括拋幽f門P瑚括Baker．)的根莖，別名竹根參、竹節(jié)七、牛尾七、包谷七等，用藥來源為開口箭的干燥根莖。多年生草本，主要生長在海拔1000m～2000m的林下陰濕處、溪邊或路旁，主要分布于陜西、湖北、江西、福建、浙江等地

3、，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、散瘀止痛等功效。通過前期文獻(xiàn)查閱，我們發(fā)現(xiàn)竹根七中的主要成分為甾體皂苷，為了便于今后的研究，我們以乙醇濃度，提取時(shí)間，提取次數(shù)和溶媒倍量為影響因素，采用Box—Behlll(en實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對竹根七總皂苷提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，得到竹根七皂苷類成分最佳提取工藝為11倍量65％的乙醇提取3次，每次65min?；谇捌诘难芯砍晒?，我們采用熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)以及蛋白印記(westemblot)等技術(shù)研究了竹根七總皂苷對HepG2細(xì)胞凋亡和周期變化的影響，并對其作用機(jī)制進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，其機(jī)制可能是通過藥物刺激引起細(xì)胞內(nèi)P53蛋白表達(dá)水平升高，從而

4、影響B(tài)ax和Bcl—2表達(dá)，誘導(dǎo)線粒體凋亡因子的釋放和caSpaSe的級聯(lián)激活，將HepG2細(xì)胞阻滯于s期，并最終導(dǎo)致凋亡的發(fā)生。研究結(jié)果表明，皂苷類成分是竹根七抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)，竹根七總皂苷在將來有希望作為一種中藥有效部位提取物應(yīng)用于腫瘤的治療中。本論文對竹根七進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)研究，利用現(xiàn)代分離色譜手段，從竹根七65％乙醇提取物中分離得到10個(gè)化合物，通過理化常數(shù)測定、薄層色譜檢測和各種波譜學(xué)特征(1H．NMR、13C-NMR)分析，定了1O個(gè)化合物。分別為：25限)一Spirost．5．en一1∥，3倪-diol(3一印imscogenin)(1)、蘭茂苷元甲(Ra

5、nmogellinA)(2)、TupichigeIlinB(3)、tupicmIlinA(5)、△25(27)-PentrogeIliIl(6)、spifost25(27)一en一1∥，印，筇，鄰，觀筇，7伉-h印tol(7)、1∥，筇，筇，4屈筇，7僅-hexallydroxy-spirost一25(27)-ene-6一one(8)、25(R)-1∥一hy(1roxy—spirost一5一en．3口一yl0一∥一D—glucopyranoside(9)、筇一缸o(hù)st一△25(27)一en一1屈Z厲筇，4屈5屈7僅，22己26一octaol一6-one一26一D-∥一D

6、—glucopyralloside(10)、tllpistemideB(11)。其中化合物9為首次從該種植物中分離得到。上述研究成果完善了竹根七的化學(xué)成分，并為進(jìn)一步活性研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。并采用MTT法對化合物1、2、3、4、5、7、8、11進(jìn)行了體外人源肝癌HepG2細(xì)胞株、人源肺癌A549細(xì)胞株及人源宮頸癌Hela細(xì)胞株的體外抗腫瘤活性研究；采用DPPH法對化合物1、2、3、4、5、7、8、11進(jìn)行了體外抗氧化活性研究。結(jié)果表明，化合物5對H印G2、Hela及A549細(xì)胞的增值均有很強(qiáng)的抑制作用，而化合物11則具有很好的清除DPPH自由基的作用。為進(jìn)

7、一步的藥理學(xué)研究提供了方向。關(guān)鍵詞：竹根七，化學(xué)成分，抗腫瘤，抗氧化，總皂苷StudyontheantitumorEffectiveSubstancefromrhizomesofTupiStraChinenSisAbstractZhugenqi，alsocalledzhugenshen，Z姍ieqi，NiuweiqiaJldBaoguqi，istherhjzomeofT卻istrachinensisBaker．w11ichbelongstoT'uspit迅Liliaceae．Zhugenqi，aperenIlialherb，oRengro