資源描述：
《羽衣甘藍srk和scr的克隆表達及克服自交不親和性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、東北林業(yè)大學碩士學位論文羽衣甘藍SRK和SCR的克隆表達及克服自交不親和性的研究姓名：于曉敏申請學位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學指導教師：李玉花20070601摘要羽衣甘藍(Brassicaoleraceavat．a(chǎn)cephala)是一種典型的孢子體型自交不親和性(Self-incompatibility，SI)植物，在遺傳上，羽衣甘藍SI受具有復等位基因的S單倍型控制，并且認為S單倍型上S受體蛋白激酶(S-locusreceptorkinase，SRK)和S位點富含半胱氨酸的蛋白(S-locuscysteine-richprotein，SCR)／SPll(
2、S-locusprotein11)分別控制著花粉(雄性)和柱頭乳突細胞(雌性)的SI。本文獲得了SRK激酶域的eDNA片段、艘K表達的全長序列、犯ReDNA序列和雙豫DNA序列克隆共四個克隆。確定了本試驗材料9號“赤兔”自交不親和系的基因型為研36單倍型。并進行了一些克服花粉自交不親和性的探索性試驗。得到以下結(jié)論：(1)采用Northern雜交方法確定了SRK基因只在>10mm和8-10mm長的花蕾中有表達，且>10mm花蕾的表達量大于8-10mm花蕾的表達量。(2)分離出一種新基因SCR，3b，此基因與SCR，j序列有較高的同源性，它含有一個758bp的
3、內(nèi)含子，編碼一個由78個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。SCRl3b在N端含有24個氨基酸的信號肽區(qū)域，在C端有由54個氨基酸組成的成熟蛋白區(qū)域。在原核細胞中表達并純化了SCRl3b蛋白，獲得了一個約32kDa左右的蛋白質(zhì)條帶，為進一步探討＆碾m的功能奠定了基礎(chǔ)。(3)確定了克服花粉自交不親和性的C02激光和高壓靜電場的處理劑量，即C02激光的TISl(燒灼延時5’，照射一次)處理，高壓靜電場的E3(75kV／m)處理。(4)通過測量花粉管萌發(fā)率及一定時『日J內(nèi)花粉管的萌發(fā)長度，我們知道在花粉萌發(fā)培養(yǎng)基中加入自交不親和系同株柱頭的蛋白粗提物會抑制花粉管的萌發(fā)和生長。萌
4、發(fā)前加入不親和柱頭蛋白，電場處理的萌發(fā)率高于未處理花粉的萌發(fā)率；萌發(fā)后加入不親和柱頭蛋白，電場處理過的花粉管能繼續(xù)生長，而未處理的花粉管則停止塵長。(5)用fluo．3標記花粉管中的ca2+，激光共聚焦顯微鏡觀察后發(fā)現(xiàn)電場處理過的花粉受到不親和刺激后仍然保持著Ca2+濃度梯度，花粉管可繼續(xù)生長；而沒有被電場處理過的花粉受到不親和刺激后其Ca2+濃度梯度消失，Ca2+在花粉管內(nèi)呈彌散狀念。(6)通過蛋白質(zhì)雙向電泳實驗，我們比較了電場處理花粉自交授粉3h(電場)后柱頭蛋白的表達、未處理花粉自交授粉3h(自交)后柱頭蛋白表達、雜交授粉3h(雜交)后柱頭蛋白表達、
5、未授粉空柱頭(CK)的蛋白表達四者之『日J的差異，結(jié)果顯示電場處理后的蛋白表達與雜交的蛋白表達相似，都在同一區(qū)域比CK和自交圖譜多了一些表達點，說明這些點是授粉后親和情況下表達的蛋白點，而電場處理使本應不親和的過程變得親和，電場對克服植株的自交不親和性起到了一定作用。關(guān)鍵詞羽衣甘藍，自交不親和，函∞單倍型，激光共聚焦顯微鏡，蛋白質(zhì)雙向電泳AbstractOrnamentalkale(Brassicaoleraceavar．a(chǎn)cephala)isakindoftypicalsporophyticself-incompatibleplant．111esporo
6、phyticself-incompatibility(SSI)isgeneticallycontrolledbymulti-allelicSloci，andthemaleSIandfemaleSIarecontrolledbyS-locusreceptorkinase(SRK)andS-Iocnscysteine-richprotein(SCR)／S-locusproteinll(SPI1)’respectively．Inthisstudyweobtainedfourclones，i．e．。thoseotsRKkinasedomain，thefullseq
7、uenceotsRKexpressionfragment。&姐cDNAsequence，and雙豫DNAsequence．ItWaSconfirmedthatthegenotypeoftheself-incompatiblematerialsweusedinthisstudywas$13bhaplotype．Inaddition,someresearchesaboutovercomingthepollenself-incompatibilitywereundertaken．Resultsareasfollows：(1)nleexpressionofSRKg
8、eneinstigmasatfivedevelopmentalst
