ampa受體在癲癇后認(rèn)知功能損傷大鼠海馬中的表達(dá)變化

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AMPA受體在癲癇后認(rèn)知功能損傷大鼠海馬中的表達(dá)變化姓名：胡華偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：王維平20080301河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名：厶世緯導(dǎo)師簽名：訓(xùn)峰學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名：伊移’年j}月3秒

2、日研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：如鲆{扣導(dǎo)師簽名：乏釘嶧“年夸月羅口日中文摘要AMPA受體在癲癇后認(rèn)知功能損傷大鼠海馬中的表達(dá)變化摘要目的：癲癇(epilepsy，EP)是一組不同病因引起的慢性腦部疾病，以大腦神經(jīng)元過(guò)度放電所致的短暫中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征，具有反復(fù)發(fā)作的傾向。癲癇的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全闡明。很多癲癇患者除臨床癇性癥狀發(fā)作外，常伴有學(xué)習(xí)記憶減退，成為影響患者生存質(zhì)

3、量的一個(gè)重要原因。有學(xué)者研究認(rèn)為癲癇患者30％。40％存在認(rèn)知功能障礙。a．氨基．3．羥基．5．甲基．4．異唑丙酸(a．a(chǎn)mino．3．hydroxy一5．met．hyl．4一isoxazolepropionicacid，AMPA)受體是谷氨酸受體的一個(gè)亞型，AMPA受體是由GluRl．GluR4(或GluRA～GluRD)組成的異源型4聚體復(fù)合物，其中GluRl是AMPA受體的一個(gè)重要組成部分。近年來(lái)研究認(rèn)為，GluRl與正常突觸傳遞，突觸可塑性以及空間學(xué)習(xí)記憶均密切相關(guān)。迄今為止，GluRl與癲癇后認(rèn)知功能障礙關(guān)系的研究甚少。本試驗(yàn)利用戊四氮(pentylenetraz

4、01e，PTZ)誘導(dǎo)出慢性癲癇動(dòng)物模型(chronicepilepticgroup，CEP)，通過(guò)腦電圖(electroencephalogram，EEG)，Morris水迷宮試驗(yàn)(Morriswatermazet)、交替電刺激Y迷宮試驗(yàn)(alternativeelectro—stimulusYmazetest，AESYT)、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT—PCR)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，觀察GluRl在癲癇大鼠海馬的表達(dá)變化，以探討其與癲癇后大鼠認(rèn)知功能改變的關(guān)系，為進(jìn)一步研究癲癇患者記憶中

5、文摘要損害的機(jī)制提供線索。方法：1造模1．1分組成年雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠50只，體重(200±20)g，經(jīng)過(guò)兩次交替電刺激Y迷宮試驗(yàn)篩選，合格者進(jìn)行模型制備。篩選后獲得合格動(dòng)物48只，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成兩組：慢性癲癇發(fā)作組(CEP組)和對(duì)照組(NG組)。制模過(guò)程中大鼠出現(xiàn)死亡或不符合模型要求者，予以剔除并隨機(jī)補(bǔ)充，以保證每組動(dòng)物8只。1．2慢性癲癇動(dòng)物模型的建立慢性癲癇發(fā)作組(CEP組)每日腹腔注射1％PTZ35mg／kg，直到大鼠連續(xù)3次注射期間均有RacinelV級(jí)或以上的癇性發(fā)作被認(rèn)為完全點(diǎn)燃。對(duì)照組(NG組)同時(shí)腹腔注射同等容量的生理鹽水。2

6、腦電圖CEP組大鼠完全點(diǎn)燃后，每組隨機(jī)取2。3只大鼠，麻醉后固定于腦立體定位儀上，放置雙側(cè)皮質(zhì)和雙側(cè)海馬電極，待大鼠清醒后，腹腔注射PTZ致大鼠有癇性發(fā)作，并描記腦電圖，驗(yàn)證點(diǎn)燃效果。3認(rèn)知功能檢測(cè)造模成功后第31天，分組進(jìn)行認(rèn)知功能檢測(cè)。分別進(jìn)行交替電刺激Y迷宮試驗(yàn)和Morris水迷宮試驗(yàn)。4逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)認(rèn)知功能檢測(cè)完畢后迅速分離海馬。經(jīng)提取海馬總RNA、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、引物擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖中文摘要凝膠上電泳，用UVP凝膠圖像成像系統(tǒng)掃描定量并攝像電泳條帶的灰度。凝膠圖像分析系統(tǒng)分析結(jié)果。5免疫組織化學(xué)染色麻醉狀態(tài)下經(jīng)左心室行主動(dòng)脈插管，4％多聚甲醛溶液

7、進(jìn)行灌注，取腦固定，常規(guī)包埋，標(biāo)本冠狀位石蠟切片。經(jīng)抗原修復(fù)、羊血清封閉后，分別加GluRl多克隆抗體，再經(jīng)二抗、三抗孵育，DAB顯色后置顯微鏡下觀察記錄。結(jié)果：1癲癇行為學(xué)各模型組大鼠均出現(xiàn)不同程度的癇性發(fā)作，造模成功。2腦電圖改變CEP組大鼠陣發(fā)出現(xiàn)大量高幅尖波、棘波、棘慢復(fù)合波。NG組大鼠腦電圖以a、B波，散在0波即基礎(chǔ)波為主，無(wú)明顯節(jié)律。3認(rèn)知功能檢測(cè)3．1Morris水迷宮試驗(yàn)3．1．1定位航行試驗(yàn)(Placenavigationtest，PNT)CEP組與NG組相比，第1天無(wú)明顯差異(P>O．05)，第