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《α-葡萄糖苷酶活性檢測及抑制劑篩選新方法研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中圖分類號：單位代號：10280密級：學(xué)號：12721997碩士學(xué)位論文SHANGHAIUNIVERSITYMASTER’SDISSERTATION題α-葡萄糖苷酶活性檢測及抑目制劑篩選新方法研究作者劉瑩學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)導(dǎo)師張娟完成日期2015年5月上海大學(xué)碩士學(xué)位論文上海大學(xué)本論文經(jīng)答辯委員會全體委員審查,確認符合上海大學(xué)碩士學(xué)位論文質(zhì)量要求。答辯委員會簽名：主任：委員：導(dǎo)師：答辯日期：I上海大學(xué)碩士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫過的研究成果。
2、參與同一工作的其他同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。簽名：日期：本論文使用授權(quán)說明本人完全了解上海大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留論文及送交論文復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容。（保密的論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）簽名：導(dǎo)師簽名：日期：II上海大學(xué)碩士學(xué)位論文上海大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)碩士學(xué)位論文α-葡萄糖苷酶活性檢測及抑制劑篩選新方法研究姓名：劉瑩導(dǎo)師：張娟學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2015年5月III上海大學(xué)碩士學(xué)位論文ADissertationSubmitt
3、edtoShanghaiUniversityfortheDegreeofMasterinBiochemistryandMolecularBiologyStudyofNewMethodsforα-GlucosidaseActivityAssayandItsInhibitorsScreeningM.D.Candidate：YingLiuSupervisor：JuanZhangMajor：BiochemistryandMolecularBiologySchoolofLifeSciences,ShanghaiUniversityMay,2015IV上海大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要I
4、I型糖尿病是一種非胰島素依賴型的糖尿病，持續(xù)性的高血糖是其診斷的依據(jù)，通過控制血糖水平可以有效防止糖尿病的惡化。α-葡萄糖苷酶分布于小腸刷狀緣膜上皮細胞上，是水解碳水化合物的關(guān)鍵酶，它能從低聚糖類底物的非還原端切開α-1,4糖苷鍵，釋放出葡萄糖，葡萄糖經(jīng)小腸吸收進入血液，導(dǎo)致血糖水平的上升，故抑制α-葡萄糖苷酶的活性能夠延緩碳水化合物的消化，減緩葡萄糖的吸收，抑制餐后高血糖。因此，測定α-葡萄糖苷酶的活性，從天然或合成化合物中快速準確篩選α-葡萄糖苷酶抑制劑將具有重要意義。然而當(dāng)前α-葡萄糖苷酶抑制劑的體外分子水平篩選方法存在準確度不高的缺點，而動物水平的方法所需時
5、間長，無法滿足快速準確篩選的要求。本論文針對現(xiàn)有檢測方法的不足，從硼酸衍生物對糖類分子的特異性識別角度出發(fā)，分別從體外分子水平和細胞水平構(gòu)建了兩種檢測α-葡萄糖苷酶活性及抑制劑的生物傳感器。具體內(nèi)容如下：1、一種簡單可視的檢測α-葡萄糖苷酶活性及其抑制劑篩選的光譜方法針對當(dāng)前α-葡萄糖苷酶抑制劑體外分子水平篩選方法酶-底物法在篩選具有共軛結(jié)構(gòu)的分子時可能出現(xiàn)假陽性的缺陷，在本論文部分工作中，我們利用金納米顆粒（AuNPs）優(yōu)良的光學(xué)性質(zhì)，通過苯二硼酸（PDBA）對α-葡萄糖苷酶底物的特異性識別，構(gòu)建了一種檢測α-葡萄糖苷酶活性及其抑制劑篩選的光譜學(xué)法。該方法的建立是
6、基于1,4-苯二硼酸對底物4-氨基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（pAPG）中2位和4位順式鄰二羥基的特異性識別，這種識別將誘發(fā)pAPG功能化金納米顆粒（AuNPs）的聚集，導(dǎo)致溶液顏色的變化。作為α-葡萄糖苷酶的底物，pAPG能夠被水解為4-氨基苯酚（pAP）。與底物pAPG不同，水解產(chǎn)物pAP因不含有順式鄰二羥基基團無法被PBDA識別，無法引起AuNPs的聚集和相應(yīng)的顏色變化，由此可檢測α-葡萄糖苷酶的活性。在最優(yōu)化的實驗條件下，650nm處的吸光度與520nm處吸光度的比值與α-葡萄糖苷酶的活性呈現(xiàn)線性相關(guān)，其線性檢測范圍為0.05到1.1U/mL，最低檢測限為0.
7、004U/mL。同時，我們進一步用所構(gòu)建的方法評價了沒食子酸和槲皮素對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，測得兩種物質(zhì)的IC50值分別為1.16mM和1.82μM。該方法克服了當(dāng)前常用光譜方法在紫外區(qū)測定酶活和篩選抑制劑的缺陷，具有寬的線性檢測范圍，低的檢測限，高的準確V上海大學(xué)碩士學(xué)位論文度，在α-葡萄糖苷酶活性的檢測及其抑制劑的篩選方面顯示了良好的應(yīng)用潛力。2、從體外分子水平和細胞水平上雙重檢測α-葡萄糖苷酶活性及其抑制劑的電化學(xué)方法針對當(dāng)前α-葡萄糖苷酶抑制劑體外分子水平和細胞水平篩選方法準確度不高的問題，在本論文部分工作中，我們利用磁納米顆粒（MNPs）/pAPG
