野薔薇苷對缺氧性心肌損傷的保護作用及其機制研究

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1、授予單位代碼１００８９學號獅請?zhí)枺玻埃保常玻埃矗梗崳娭嘘P(guān)書分類號Ｒ？６６＿＿ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ碩士學位論文科學學位野薔薇苷對缺氧性心肌損傷的保護作用及其機制研宄研宄生：髙文揚導師：李靈芝教授指導老師：李建宇講師專業(yè)：藥理學二級學院：武警后勤學院２０１６年３月河北醫(yī)科大學學位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學位論文在導師（或指導小組）的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研宄所獲得的研宄成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科

2、大學有權(quán)對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要一內(nèi)容相關(guān)的論文，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、，第署名為單位河北醫(yī)科大學。。申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學所有否則，承擔相應(yīng)法律責任Ｓ研究生簽導師簽章二級學院領(lǐng)章＾＾７＾＾＾河北醫(yī)科大學研宄生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研宄。成果，指導教師對此進行了審定本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研宄生簽名導師簽＾７Ｗ年“

3、曰７目錄中文摘要１英文摘要５英文縮寫１０研宄論文野薔薇苷對缺氧性心肌損傷的保護作用及其機制研究第一部分野薔薇苷對急性低壓缺氧誘導大鼠心肌損傷的保護作用Ｉｔｓ１１材料與方法１３觀１７關(guān)１９討論２３雜２５參考文獻２６第二部分野薔薇苷對Ｈ９ｃ２心肌細胞缺氧性損傷的保護作用及機制研究賄２８材料與方法３０棘３８酬４２滿５７結(jié)論６２參考文獻６３綜述細胞死亡信號轉(zhuǎn)導通路在心肌組織中的相互作用６５麵７８

4、個人簡歷７９中文摘要野薔薇苷對缺氧性心肌損傷的保護作用及其機制研宄摘要目的：通過建立心肌缺氧損傷的動物模型和細胞模型，觀察野薔薇苷在體內(nèi)對缺氧誘導心肌組織、細胞損傷的保護作用及其作用機制，為研發(fā)新型抗缺氧藥物提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法：本實驗內(nèi)容分為兩部分。第一部分：野薔薇苷對急性低壓缺氧誘導大鼠心肌損傷的保護。１實驗分組：清潔級雄性大鼠５０只，體重（２００±２０）ｇ，隨機分為常氧對照組（Ｃ）、急性缺氧模型組（Ｍ）、野薔薇苷高濃度組Ｈ、野薔薇苷（）低濃度組（Ｌ）、地塞

5、米松陽性對照組（Ｎ）。２急性低壓缺氧模型的建立：將大鼠置于低壓氧艙內(nèi)，通過調(diào)節(jié)低壓氧艙的參數(shù)設(shè)置，模擬海拔７０００ｍ高原環(huán)境的大氣壓，并將艙內(nèi)低氧環(huán)境維持１８ｈ，建立大鼠急性低壓缺氧損傷模型。３利用生化檢測試劑盒，檢測各組大鼠心肌組織勻漿中的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、乳酸脫氣酶（ＬＤＨ）的含量。４采ａｒ－ＯＮａｌｓｅｎ染色法，用ＨＥ染色法和ｇ對心肌組織進行染色，觀察急性缺氧導致的病理學改變。５利用Ｗｅｓ－ｔｅｍｂｌｏｔ技術(shù)檢測心肌組織中凋亡相關(guān)蛋白

6、ＣｙｔＣ的表達。第二部分：野薔薇苷對Ｈ９ｃ２心肌細胞缺氧性損傷的保護作用及機制研宄。１實驗分組：將生長狀態(tài)良好的Ｈ９ｃ２心肌細胞隨機分為５組：正常對照組（Ｃ）、缺氧模型組（Ｍ）、野薔薇苷組（Ｒ）、野薔薇苷苷元組（委陵菜酸，Ｔ）、陽性藥維拉帕米組（Ｗ）。°２Ｈ９ｃ２心肌細胞體外缺氧模型的建立：利用三氣培養(yǎng)箱（３７Ｃ，９５％Ｎ－５％Ｃ０Ｈ９ｃ２心２２），建立肌細胞缺氧損傷模型，并利用ＭＴＴ法確定Ｈ９ｃ２心肌細胞的適宜缺氧時間及野薔薇苷的給藥劑量。３利用生化檢測試劑盒，分別檢測各組心肌細

7、胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶（ＬＤＨ）漏出量以及細胞內(nèi)超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）１中文摘要和谷胱甘肽。（ＧＳＨ）含量４通過光學倒置顯微鏡觀察各組心肌細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化；利用臺盼藍染色觀察細胞存活情況ｈｅｓｔ－ＰＩ染色技術(shù)觀察；在熒光顯微鏡下利用Ｈｏｃ各組Ｈ９ｃ２心肌細胞的凋亡形態(tài)學改變。５利用流式細胞術(shù)檢測各組Ｈ９ｃ２心肌細胞的凋亡率。６利用Ｗｅｓｔｅｍ－Ｂｌｏｔ方法檢測各組細胞的線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白－、、－Ｂｃｌ２Ｂａｘ、ＣｔＣ、Ｃａｓａｓｅ９ｃｌｅａｖｅｄＣａ

8、ｓａｓｅ３蛋白水平。并在力口入ｙｐｐＥＲＫ－／１／２阻滯劑ＰＤ９８０５９后，檢測ＥＲＫｌ２和以上五種凋亡相關(guān)蛋白的ｐ。表達變化，從而探究野薔薇苷對抗缺氧性心肌損傷的作用機制一結(jié)果：第部分：野薔薇苷對急性低壓缺氧誘導大鼠心肌損傷的保護作用。１實驗動物基本情況：利用低壓