基于重鏈抗體的全氟辛酸免疫檢測的研究

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1、申請上海交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于重鏈抗體的全氟辛酸免疫檢測的研究Developmentofimmunoassayforperfluorooctanoicacidbasedonheavy-chainantibody姓名：張星學(xué)號：1127119066導(dǎo)師：王艷教授專業(yè)：勞動(dòng)衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)學(xué)院：公共衛(wèi)生學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院二零一五年四月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論義，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已

2、在文中明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：曰期：節(jié)少年曰ｙ學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可臥將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可［＾＾采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適巧本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于／不保密＂＂（請?jiān)谂P上方框內(nèi)打Ｖ）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：曰期；卻ｆ年去月曰曰期

3、；?。剩蛟氯眨崳娚虾＝煌ù髮W(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于重鏈抗體的全氟辛酸免疫檢測的研究摘要全氟辛酸（Perfluorooctanoicacid,PFOA）是一種對人體有潛在健康危害的全氟化合物（PFCs）。PFOA具有疏水疏油的特性，20世紀(jì)大量生產(chǎn)使用，對生態(tài)系統(tǒng)和人類健康的影響已經(jīng)引起人們的高度關(guān)注?，F(xiàn)在，PFOA的檢測主要依賴大型儀器，比如液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS），檢測準(zhǔn)確性高，檢測限低，但是，這些方法有很大的局限性，儀器笨重，檢測昂貴，通量低，不適于現(xiàn)場的快速高通量檢測。本研究應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，制備一種針對PFOA的特異性抗體，用于PFOA的高通量

4、快速檢測。我們應(yīng)用碳二亞胺法，將PFOA與牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)，合成完全抗原，經(jīng)SDS-PAGE電泳和離子色譜儀定性檢測，證明完全抗原合成成功。用三硝基苯磺酸法法測定偶聯(lián)比，計(jì)算得到偶聯(lián)比為9。以此完全抗原作為包被抗原，用重鏈抗體文庫進(jìn)行篩選，得到7株陽性克隆，并對重鏈抗體基因進(jìn)行修飾，利用原核生物蛋白表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行蛋白表達(dá)，得到5個(gè)抗體蛋白，以間接競爭性ELISA方法對抗體蛋白進(jìn)行活性鑒定，獲得1個(gè)有活性的抗體，有望用于建立快速檢測不同介質(zhì)中PFOA的免疫學(xué)方法。關(guān)鍵詞：PFOA，完全抗原，重鏈抗體，間接競爭性ELISA1上海交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Developmentofim

5、munoassayforperfluorooctanoicacidbasedonheavy-chainantibodyAbstractPerfluorooctanoicacid(PFOA)isakindofperfluorinatedcompounds(PFCs)whichhasthbeenusedwidelyinthe20centurybecauseofitshydrophobicityandlipophobicity.Recentlyitsimpactonecosystemandhumanhealthhasarousedpeople’sattention.Untilnow,mos

6、tmethodsofPFOAanalysisreliedonthelargeinstrumentswithhighaccuracyandlowdetectionlimit,e.g.,liquidchromatography–massspectrometry(LC-MS/MS).However,thesemethodswerenotsuitableforin-fieldfasttestduetosomelimitations,suchaslargemachine,highcostandlowthroughput.Inthisstudy,wedevelopedanimmunologica

7、lmethodforhigh-throughputdetectionofPFOAbasedonthespecificallybindingoftheantigenandtheantibody.Atfirst,aPFOA-BSAcompleteantigenwassynthesizedusingthecarbodiimidemethod.ThecombiningissucceedconfirmedbySDS-PAGEandionchromatographan