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《殼聚糖水凝膠復合脂肪間充質干細胞修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、1?萑考乾碩士學位論文殼聚糖水凝膠復合脂肪間充質干細胞修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究TheExperimentalStudyOntheRepairmentoftheRabbitArticularCartilageDefectsbyChitosanHydrogelCombinatedWithAdiposeDerivedStemCells作者:林濤導師:馮剛教授二〇一五年五月川北醫(yī)學院碩士研究生學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內容外,本論文不包含任何其
2、他個人或集體巳經發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體,均已在文中以明確方式標明。除與外單位合作項F1將予以明確方式規(guī)定外,本研究已發(fā)表與未發(fā)表成果的知識產權均歸屬川北醫(yī)學院。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。作者簽名:r戰(zhàn)X年》月&円川北醫(yī)學院碩士研究生學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定,同意學校保留并向國家冇關部門或機構送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權川北醫(yī)學院可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索,可以采用影印、縮印或
3、掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于(請在以下相應方框內打“r’?:1.保密?,在—年解密后適用本授權書。2.不保密口。作者簽名:n導師簽名:.円期年&月1^曰中圖分類號R681.3學校代碼10634UDC616.7密級授予單位川北醫(yī)學院殼聚糖水凝膠復合脂肪間充質干細胞修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究TheExperimentalStudyOntheRepairmentoftheRabbitArticularCartilageDefectsbyChitosanHydrogelCombinatedWithAdiposeDer
4、ivedStemCells作者林濤導師馮剛教授培養(yǎng)院系臨床醫(yī)學系授位類別學術學位授位級別碩士學科門類醫(yī)學學科專業(yè)外科學研究方向骨外科學(軟骨組織工程)年級2012級學號201203101二○一五年五月致謝三年的研究生求學歷程即將結束,站在畢業(yè)的門檻上,回首當年入學時的那一幅幅畫面,至今仍歷歷在目,三年的求學生涯的快樂與艱辛,發(fā)自肺腑的感謝之情難于言表,在這段難忘的歲月里,正是得益于許多前輩和老師的悉心指導以及同事、朋友們的無私幫助才使我的學業(yè)得以完成,在此,我謹向所有給予我支持的人們致以深深的謝意。本課題是在導師馮剛教授的悉心指導,
5、嚴格教誨及導師的國家自然科學基金的資助下完成的,三年來,馮剛教授對我傾注了極大的心血,在課題設計、課題的開展、問題的解決、數據的整理、實驗完成、論文修訂以及工作生活的方方面面都給了我極大的幫助。馮剛教授創(chuàng)新的科研思維,嚴謹的治學態(tài)度、務實的科研作風和對事業(yè)執(zhí)著追求的精神始終鞭策著我不懈的奮斗,是我以后工作的無限動力!值此論文完成之際,謹向馮剛教授表示最衷心的感謝!課題實驗過程中,我得到了川北醫(yī)學院組織工程與干細胞研究所陳竹、劉康助理研究員及各位師兄弟,特別是袁德超、鄧尚、白亦光、羅栩偉、楊澤龍對我科研工作的支持和幫助,在此表示由衷感
6、謝。感謝川北醫(yī)學院研究生處及各教研室全體領導、老師昔日對我學習、科研、生活和工作上的教育、幫助和鼓勵。殼聚糖水凝膠復合脂肪間充質干細胞修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究摘要目的:利用脂肪間充質干細胞作為種子細胞復合實驗室自主研發(fā)的殼聚糖水凝膠支架構建組織工程軟骨,并修復兔關節(jié)軟骨缺損,探討一種適用于臨床治療的關節(jié)軟骨缺損修復方法。方法:(1)脂肪間充質干細胞的體外培養(yǎng)和鑒定:取24周齡新西蘭大白兔皮下脂肪,膠原酶消化后體外擴增培養(yǎng)得到脂肪間充質干細胞,通過定向分化為軟骨細胞鑒定其多能性。(2)殼聚糖水凝膠的制備:1,6-己二酸異氰酸酯和聚
7、乙二醇-400制備殼聚糖水凝膠的交聯(lián)劑,將所得的交聯(lián)劑加入2%(wt%)的殼聚糖溶液,室溫下混合均勻后得到殼聚糖水凝膠,凝膠凍干后備用。(3)組織工程軟骨的體外構建:脂肪間充質干細胞種植于滅菌后的殼聚糖水凝膠上,體外培養(yǎng)1周構建組織工程軟骨。(4)關節(jié)軟骨缺損修復評價:制作兔關節(jié)軟骨缺損模型,并將動物隨機分為3組。A組為對照組,B組為殼聚糖水凝膠材料組,C組為實驗組,即植入體外初步構建的組織工程軟骨的動物。分別于術后4周、8周、12周取樣,通過大體觀察、HE染色、Safranin-O及CollagenII免疫組化染色等方法觀察缺損關
8、節(jié)軟骨的修復情況,并用國際關節(jié)軟骨修復協(xié)會ICRS制定的評分法進行大體及組織學評分。結果:(1)體外培養(yǎng)獲得大量兔脂肪間充質干細胞,經鑒定其能很好的向軟骨細胞分化,表明其完全可以作為組織工程軟骨構建種子細胞來源。(2)大體觀察可見:實