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1、白藜蘆醇對HCV增殖影響的研究ResveratrolaffectsHepatitisCviruspropagation作者姓名：ChauPingsaymangManpoong專業(yè)名稱：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：?？∑娼淌趯W(xué)位類別：醫(yī)學(xué)碩士答辯日期：2015年06月07日JilinUniversityNormanBethuneCollegeofMedicineTheFirstHospitalofJilinUniversityRESVERATROLAFFECTSHEPATITISCVIRUSPROPAGATIONThesispresentedbyCHAUPINGSAYMANGMANPOO
2、NGFortheDegreeofMDinInternalMedicine(Hepatology)UnderSupervisionofPROFESSORJUNQINIUDepartmentofHepatologyTheFirstHospitalofJilinUniversitySubmittedtoInternalMedicine(DepartmentofHepatology)TheFirstHospitalofJilinUniversityNormanBethuneCollegeofMedicineJilinUniversity中文摘要白藜蘆醇對HCV增殖影響的研究HCV感
3、染是日益受到關(guān)注的全球公共衛(wèi)生問題，是慢性肝臟疾病的主要病因之一。近1.3-1.7億的人口是慢性HCV感染者，占世界人口的2-3%。慢性HCV感染者，20年后進展為肝硬化的概率為4-24%，30年后罹患原發(fā)性肝癌的概率為1–3%。HCV治療隨著對HCV基因組和分子病毒學(xué)領(lǐng)域的深入研究而取得了新的進展，HCV蛋白酶抑制劑（DAA）的出現(xiàn)更是將該領(lǐng)域的研究推向巔峰。自2011年9種DAA藥物的上市，在HCV治療上，獲得高達≥90%持續(xù)的病毒學(xué)應(yīng)答率（SVR）突破性的進展,且有較小的副作用；然而，高額的治療費用仍是限制大多數(shù)新興的DAA藥物應(yīng)用的重要因素，大部分急需治療的患者不能
4、及時用藥導(dǎo)致病毒清除的失敗。雖然在過去的10余年，HCV感染的治療取得了很多突破性的進展，但目前仍未有獲得審批的疫苗，同時DAA藥物的高額費用限制了DAA藥物的使用，這使新的治療手段的開發(fā)尤為必要。白藜蘆醇(RVT)是一種存在于多種植物及水果中的多酚類化合物。研究表明，這種酚類合成物是長壽基因（sirtuin）的強效激活劑，該基因與壽命的長短有關(guān)，同時被認為是飲用紅酒時產(chǎn)生多酚類化合物中最為有益的成分，也被稱為：法國悖論（法國人酷愛美食，平時飲食中攝取大量高卡路里和高膽固醇的食物，但得心血管疾病的幾率卻比英語國家的人要低得多）。多酚白藜蘆醇分子中含有亞甲基橋隔開的兩個苯環(huán)的
5、分子，是第一個發(fā)現(xiàn)能夠通過刺激的SIRT分泌發(fā)揮作用。Sirtuins1-7（SIRT1-7）屬于第三類脫乙?；?，它依賴于NAD+的發(fā)I揮活化作用。SIRT可以參與基因抑制，代謝控制，細胞凋亡和細胞存活，DNA修復(fù)，神經(jīng)保護和老齡化等調(diào)節(jié)作用。到目前為止研究最廣泛的一直是SIRT1。AMPK和SIRT1是構(gòu)成RVT的兩個關(guān)鍵指標。RVT可以抑制線粒體ATP生產(chǎn)，導(dǎo)致了更高的AMP/ATP比和AMPK的LKB1依賴性活化。然后，AMPK可以提高NAD+供應(yīng)，該輔因子能夠提高SIRT1的酶活性，從而改善速率限制。本研究的目的旨在探討白藜蘆醇對HCV繁殖周期的影響。據(jù)報道，白藜
6、蘆醇有抗腫瘤、抗炎癥、抑制肥胖以及抗細菌的特性，同時又具有保護心血管系統(tǒng)的功能。白藜蘆醇在非酒精性肝臟疾病中具有升高炎癥因子的作用。此外，前期研究表明白藜蘆醇可以抑制人類巨細胞病毒（HCMV）、單純皰疹病毒(HSV-1)、水痘-帶狀皰疹病毒和甲型流感病毒的復(fù)制。在本研究中使用huh7.5.1細胞系來完成實驗，首先對白藜蘆醇的細胞毒性進行評價，在兩個細胞培養(yǎng)基中分別加0ug/ml、1ug/ml、3ug/ml、5ug/ml、6ug/ml、7ug/ml、8ug/ml、10ug/ml、13ug/ml，其中一個培養(yǎng)基培養(yǎng)48h、另一個培養(yǎng)96h，之后用MTT試劑盒檢測細胞活性，發(fā)現(xiàn)0
7、-5ug/ml時,細胞大多數(shù)都有活性，然而6-13ug/ml時細胞死亡明顯，因此白藜蘆醇通過評價，最終選擇出沒有細胞毒性的劑量。本實驗通過檢測細胞培養(yǎng)衍生的HCV顆粒（HCVcc）中的JCR-2a進行研究，JCR-2a是一種新穎的單順反子海腎熒光素酶受體病毒，這種病毒是通過HCV2a型轉(zhuǎn)染質(zhì)粒Jc1后得到。JCR-2a標記的HCV顆粒可以在體外存在，因此，是一種廣泛使用丙型肝炎病毒完整的復(fù)制周期模型。II首先，將JCR-2a轉(zhuǎn)染細胞，4h后加不同濃度（0、1、3、5ug/ml）的白藜蘆醇,繼續(xù)培養(yǎng)72h,向細胞培養(yǎng)
