靶向h、n基因sirna抑制vero細(xì)胞中cdv的增殖研究

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1、分類號(hào)：Ｓ８５２．６Ｓ５單位代碼：１０１８３研究生學(xué)號(hào)：２０１２８５２００３密級(jí)：公開馨古林大學(xué)碩女學(xué)位論文學(xué)術(shù)樂化（）鞭向Ｈ、Ｎ基因ＳｉＲＮＡ抑制Ｖｅｒｏ細(xì)胞中ＣＤＶ的增殖研究ＩｎｈｉｂｉｔｉｎｔｈｅｒｅｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｎｇｐｉｎｅｄｉｓｔｅｍｅｒｖｉｒｕｓＣＤＶｉｎｖｅｒｏｐ（）ｃｅｌｌｓｂｙｓｉＲＮＡｔａｒｅｔｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅｏｃａｓｉｄｒｏｔｅｉｎｅｎｅａｎｄｔｈｅｇｇｐｐｇｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｐｒｏｔｅ

2、ｉｎｇｅｎｅ作者姓名：袁巧專業(yè)：動(dòng)物學(xué)研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)指導(dǎo)教師：任文砂教授培養(yǎng)單位：動(dòng)物科學(xué)學(xué)院２０１５年１２月未經(jīng)本論文作者的書面授權(quán)，依法收存巧保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個(gè)人，均不得對(duì)本論文的全部或部分內(nèi)容進(jìn)行任何形式的復(fù)制、修改、發(fā)巧、出租、改編等有礙作者著作權(quán)的商業(yè)性使用（但純學(xué)術(shù)性使用。不在此限）。否則，應(yīng)承擔(dān)侵權(quán)的法律責(zé)任吉林大學(xué)碩±學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學(xué)位論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工

3、作所取得的成果。除文中己經(jīng)經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名曰期；年月｜２靶向H、N基因siRNA抑制CDV在Vero細(xì)胞上的增殖研究Inhibitingthereplicationofcaninedistempervirus（CDV）inverocellsbysiRNAtargetingthenucleocapsidprote

4、ingeneandthehemagglutininproteingene作者姓名：袁龍專業(yè)名稱：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：任文陟教授學(xué)位類別：理學(xué)碩士答辯日期：2015年12月04日本研究資助項(xiàng)目吉林省科技發(fā)展計(jì)劃青年科研基金（201201014）JilinprovincescienceandtechnologydevelopmentprogramYouthResearchFund（201201014）前言犬瘟熱是犬科常見易患的病毒性疾病，該病具有高接觸性、高傳染性和高死亡性。同時(shí)該病也可以傳染給其他物種，比如鼬科以及部分浣

5、熊動(dòng)物。目前尚無有效治療藥物，而弱毒疫苗特異性差、容易變異等缺點(diǎn)，也無法使動(dòng)物免受感染。因此尋找該病的預(yù)防手段和治療方法十分重要。RNA干擾（RNAinterference，RNAi）是由雙鏈RNA（double-strandedRNA，dsRNA）分子激發(fā)的有效防御機(jī)制。小干擾RNA（siRNA）能表達(dá)目的蛋白、保護(hù)宿主免受病毒感染、病毒基因組轉(zhuǎn)錄調(diào)控、抑制抗原表達(dá)，揭示病毒與宿主相互作用的影響。CDV基因編碼的血凝素蛋白（H蛋白）是CDV囊膜表面的糖蛋白之一。病毒通過H蛋白使病毒囊膜和宿主細(xì)胞膜粘合，因此H蛋白

6、決定了宿主的特異性，同時(shí)融合蛋白（F蛋白）使病毒囊膜和宿主細(xì)胞膜進(jìn)行融合，達(dá)到病毒入侵宿主的目的，H蛋白也可以使機(jī)體產(chǎn)生抗體。CDV核衣殼蛋白（N蛋白）是保守性較強(qiáng)的蛋白。并且，N蛋白上含有T細(xì)胞表位，病毒感染時(shí)可以引起劇烈的免疫反應(yīng)。因此本實(shí)驗(yàn)將CDV的H基因與N基因作為RNAi的目的基因，通過RNAi技術(shù)進(jìn)一步了解靶向siRNA如何影響CDV在vero細(xì)胞中的增殖。本實(shí)驗(yàn)證明犬瘟熱病毒在Vero細(xì)胞中的增殖特點(diǎn)。設(shè)計(jì)合成靶向CDVH基因和N基因的siRNA，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后檢測(cè)siRNA對(duì)CDV的抑制效果；結(jié)果表明靶

7、向N基因和H基因siRNA均能有效抑制CDV增殖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果能為CDV的防控提供新的思路以及為研究CDV復(fù)制和感染機(jī)制提供參考依據(jù)。I中文摘要靶向H、N基因siRNA抑制Vero細(xì)胞中CDV增殖效果研究犬瘟熱（caninedistemper，CD），是由犬瘟熱病毒（caninedistempervirus，CDV）感染犬科等動(dòng)物引起的一種高接觸性的烈性傳染病。該病傳染性強(qiáng)，死亡率高，范圍遍布全世界，給動(dòng)物保護(hù)和經(jīng)濟(jì)養(yǎng)犬業(yè)造成了巨大的損失。目前該病以預(yù)防為主，尚無有效治療手段。RNA干擾（RNAinterference

8、，RNAi）是一種由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，是古老的生物體內(nèi)的自我防御機(jī)制。RNA干擾技術(shù)現(xiàn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于病毒病、治療和靶點(diǎn)選擇、保護(hù)宿主免受病毒感染、病毒基因組轉(zhuǎn)錄調(diào)控、表達(dá)目的蛋白、抑制抗原表達(dá)，揭示病毒與宿主相互作用的影響。CDV核衣殼蛋白（nucleocapsid，N）是包裹在RNA外的一層螺旋狀蛋白，是CDV基因中最保守的區(qū)域。N蛋白基因組中