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《中華絨螯蟹（eriocheir sinensis）生殖相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)模式研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、SOOCHOWUNIVERSITY碩士學(xué)位論琴i論文題目廣師日中華絨螯蟹?Eriocheirsinensis生殖相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)模式研究研究生姓名王敏吳萍指導(dǎo)教師姓名蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教龍_學(xué)慨側(cè)賴_材料。_翅研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：a期：蘇州
2、大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所（含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年―月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文ta
3、"論文作者簽名：日期：2^1中華絨螯蟹（Eriocheirsinensis）生殖相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)模式研究中文摘要摘要生殖細(xì)胞的發(fā)生是發(fā)育生物學(xué)研究的主要內(nèi)容之一，同時(shí)也是一個(gè)復(fù)雜的發(fā)育調(diào)控并涉及時(shí)空的多基因活動(dòng)過程。其中原始生殖細(xì)胞起源、遷徙、分化等方面的研究，是備受關(guān)注的生物學(xué)研究方向。與其他模式生物相比，十足目動(dòng)物關(guān)于生殖發(fā)育的分子機(jī)制方面的研究相對(duì)薄弱。因此，鑒定和發(fā)現(xiàn)十足目生殖相關(guān)的基因并探索其功能，具有重要意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。本文以中華絨螯蟹為研究對(duì)象，通過現(xiàn)有研究和相關(guān)文獻(xiàn)的查閱，對(duì)與中華絨螯
4、蟹生殖發(fā)育有著密切聯(lián)系的vasa、piwi、nanos、PL10基因進(jìn)行研究。研究主要分為四個(gè)部分：1、中華絨螯蟹vasa基因的表達(dá)分析及表達(dá)模式研究vasa基因是生殖質(zhì)的主要組成成分之一，且在生殖腺中特異性表達(dá)，?？勺鳛槭聚櫳诚傩纬傻姆肿訕?biāo)記。本文采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)vasa基因在中華絨螯蟹胚胎及幼體發(fā)育階段的表達(dá)情況進(jìn)行了研究，研究發(fā)現(xiàn)，vasamRNA在胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá)量相對(duì)幼體發(fā)育階段表達(dá)量要高，推測(cè)vasamRNA可能主要作用于胚胎發(fā)育階段。對(duì)精巢和卵巢的原位雜交結(jié)果表明，vasamRNA在精
5、母細(xì)胞中分布于染色質(zhì)中，在精子細(xì)胞中主要分布于核杯，在卵母細(xì)胞中定位于細(xì)胞質(zhì)。整胚原位雜交發(fā)現(xiàn)，胚胎和幼體發(fā)育時(shí)期vasamRNA表達(dá)集中分布，可根據(jù)vasamRNA的分布初步推斷中華絨螯蟹的性腺生成軌跡。2、中華絨螯蟹piwi基因克隆及表達(dá)研究Piwi基因在果蠅中有維持生殖干細(xì)胞和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的功能，甲殼類中對(duì)此基因的研究非常少。本文采用SMARTTMRACE技術(shù)，克隆了piwi基因全長(zhǎng)序列。piwi基因的cDNA全長(zhǎng)3253bp（GenBank注冊(cè)號(hào)：KR061909），5’UTR26bp，3’UTR179b
6、p，開放閱讀框ORF2868bp，編碼955個(gè)氨基酸。多序列比對(duì)和同源性分析表明中華絨螯蟹的piwi基因和三疣梭子蟹的piwi基因同源性為70%?？缒^(qū)分析表明PIWI蛋白為親水性蛋白結(jié)構(gòu)。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析表明，piwimRNA在血液、肌肉、心臟、胸神經(jīng)節(jié)、鰓、肝胰腺、腸、卵巢、精巢中均有表達(dá)。但是在性腺中的表達(dá)要明顯高于其他各組織，隨著精巢的發(fā)育變化，piwimRNA的表達(dá)量逐漸減少，在精母細(xì)胞時(shí)期表達(dá)量最高；同樣在卵巢中piwimRNA也隨著卵巢的發(fā)育而發(fā)生波動(dòng)，在卵母細(xì)胞期表達(dá)量最高。在胚胎和幼體
7、發(fā)育階段，大眼幼體期表達(dá)量最高。對(duì)精巢和卵巢的原位雜交結(jié)果表明，piwimRNA在精母細(xì)胞中分布于染色質(zhì)中，在精子細(xì)胞中主要分布于核杯中，在卵母細(xì)胞中定位于I中文摘要中華絨螯蟹（Eriocheirsinensis）生殖相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)模式研究細(xì)胞質(zhì)。整胚原位雜交發(fā)現(xiàn)，以piwimRNA陽(yáng)性信號(hào)指示的生殖腺原基在心跳期已比較明顯，溞狀幼體I期時(shí)分布于頭胸甲與腹部交接處，隨著發(fā)育逐漸集中于頭胸甲背部，至溞狀幼體II期時(shí)已向頭胸甲遷移，溞狀幼體III期時(shí)更加集中，完全位于頭胸甲的背面的一個(gè)區(qū)域。3、中華絨螯蟹na
8、nos基因克隆及表達(dá)研究nanosmRNA和vasamRNA是性腺的最初成分P顆粒中的2個(gè)最重要的組成成分。本文采用SMARTTMRACE技術(shù)，克隆了中華絨螯蟹nanos基因，nanos基因cDNA序列全長(zhǎng)2886bp（GenBank注冊(cè)號(hào)：KR061910），5’UTR59bp，3’UTR1543bp，開放閱讀框ORF1284bp，編碼427個(gè)氨基酸?？缒^(qū)分析表明NA
