分月扇舟蛾幾丁質(zhì)酶dsrna轉(zhuǎn)化楊樹及其抗蟲性的研究

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1、替：喔：響學(xué)校代碼１０２２５：‘６■學(xué)號：Ｓ１５７５－三．］．＾．如嫌誠學(xué)學(xué)化備文駕薇難章分月扇舟蛾幾下質(zhì)酶ｄｓＲＮＡ轉(zhuǎn)化楊樹及其於共抗蟲性的研究０？＿．．．＇？？九Ｓ譚嘉琳－Ｖ．：．．’指導(dǎo)教師姓名：景天忠副教授東北林業(yè)大學(xué)王志英教授東北林業(yè)大學(xué)申請學(xué)位級別：森林保護學(xué)；碩±學(xué)科專業(yè)論文提交日期：２０１５年４月論文答辯日期：２０１５年６月授予學(xué)位單位；東北林化火學(xué)授予學(xué)位日期：２０１５年６月答辯委員會主席：論文評擁人；＇：毒嘿ｍｙ鑛麵被大聲Ｖ１誦

2、題讓議礦打；＞：／；中巧麟，，Ｉ１．＾、＇Ｖ，一．屬皆巧ｒ?qū)В桑墸c歡■—．＇－…一ｒ，－、＇，Ｖ，ＶＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ；１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＩｎｓｅｃｔＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ乂ｓｓａｏｆＰｏｌａｒＴｒａｎｓｆｂｒｍａｔｅｄｙｐｗｉｔｈＣｈｉｔｉｎａｓｅｄｓＲＮＡｆｒｏｍＣｌｏｓｔｅｒａａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓＣａｎｄｉｄａ化：ＴａｎＪｉａｌｉｎＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：

3、Ａ．ＰＪｉｎｇＴｉａｎｚｈｏｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＷａｎｇＺｈｉｎｇｙｉｎｇＡ＇ｄｅｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｓｇｒｅｅＳｅｃｉａｌｉｔ：ＦｏｒｅｓｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｐｙＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｊｕｎｅ２０１５Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ＾摘要一幾Ｔ質(zhì)酶基因作為昆蟲中重要的種酶類基因，參與生物體生長發(fā)育期間的攬皮及一新表皮的形成過程。

4、ＲＮＡｉＲＮＡｉｎｔｅｒｅｎｃｅ）作為種重要的基因沉默方式，它在研究生物（基因功能和防治方面得到了廣泛的應(yīng)用和研究。本文對分月扇舟蛾的幾下質(zhì)酶基因進行了克隆，，并根據(jù)其基因序列進行了它的生物信息學(xué)分析。Ｗ山新楊的葉片作為外植體－－／干涉表達載體班－ｎ構(gòu)建了幾了質(zhì)酶基因ＣＡ１１２１ＣｈｉｆｉｎｔｒｏＣｈｉｒ，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對山新楊進行遺傳轉(zhuǎn)化，并對轉(zhuǎn)化株系進行了篩選、ＰＣＲ檢測，饑ｉ基因的表達量的檢測，并對其進行了抗蟲性的研究，獲得了如下主要結(jié)果：１、采用ＳＴＥ法提取分月扇舟蛾的ＲＮＡ，并通過反轉(zhuǎn)錄獲得ｃＤＮＡ，利用ＰＣ

5、Ｒ技術(shù)對分月扇舟蛾的幾Ｔ質(zhì)酶基因進行了克隆，并根據(jù)其測序的序列對其進行基因的序列分析，了解它的氨基酸組成及含量，對其氨基酸序列進行了保守區(qū)和神經(jīng)肢的預(yù)測，并與其氨基酸序列相似的２７種幾Ｔ質(zhì)酶基因進行了多序列對比并作出進化樹，構(gòu)建出幾下質(zhì)酶基因的蛋白質(zhì)Ｈ級結(jié)構(gòu)模型。２、提化分月扇舟蛾的基因組ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技術(shù)克隆得到分月扇舟蛾神經(jīng)化ＰＢＡＮ基因的第蘭個內(nèi)含子部分序列。Ｗ分月扇舟蛾的ＲＮＡ為模版，利用ＰＣＲ技術(shù)克隆得到ＣＷ基因的保守區(qū)部分序列，然后將其正向和反向與ｆ公基因內(nèi)含子基因片段通過酶切一ＵＣ連接轉(zhuǎn)化等系列的操

6、作構(gòu)建到中間載體Ｐ１９上，并Ｗ卡納霉素作為篩選基因抗生素－－－的干涉表達載體ｐＢＩ１２１ＣｈｉｆｉｎｔｒｏｎＣｈｉｒ。最后將重組載體成功的導(dǎo)入到農(nóng)桿茜ＥＨＡ１０５中。３、Ｗ山新楊作為外植體，對其進斤抗生素的敏感性測定，并建立了最佳的遺傳轉(zhuǎn)化，通過選擇培養(yǎng)狹得了具有目的片段的轉(zhuǎn)基因山新楊植株Ｒ體系，并通過ＰＣ技術(shù)最終確定獲得了７株具有肖的片段的轉(zhuǎn)基因山新楊植株，通過萊光定量ＰＣ民確定了７種轉(zhuǎn)基因山新楊株系中表達量Ｔ４＞Ｔ７＞Ｔ２＞Ｔ６＞Ｔ５＞Ｔ３＾１．４、對含有ＣＷ基因的ＲＮＡｉ轉(zhuǎn)基因山新楊進行組織培養(yǎng)，擴大繁婚，飼喂

7、分月扇舟蛾通過突光定量ＰＣＲ發(fā)現(xiàn)口７／基因含量均降低，轉(zhuǎn)化株系Ｔ３變化最為明顯，Ｔ６轉(zhuǎn)基因、株系的變化最小，體重和死。飼喂舞毒蛾發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因山新楊株系對舞毒蛾的發(fā)育歷期亡率均無明顯影響。ＲＮＡ關(guān)鍵詞分月扇舟蛾，幾下質(zhì)酶，ｉ，轉(zhuǎn)基因，抗蟲性ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｂａｄＴｈｅＣｈｉｔｉｎａｓｅｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔｍｉｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｃｒｕｓｔａ巧ｏｎ，ｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｒｏｃｅｓｓｉｎｉｎｓｅｃｔｓＲＮＡｉＲＮＡｉｎｔｅｒｅｎｃｅａｎｉｍｏｒｔ

8、ａｎｔｗａｏｆｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｗｉｄｅｌｕｓｅｄｐ，ｓａｙ（）ｐｇｇｙａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈ