山西連翹藥材道地性和品質(zhì)評(píng)價(jià)研究

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3、巧‘；＇；－－／，＇＇■．Ｔｆ，＇一，‘’＇－＇—五ｙ．；：皆二０年六月二日＇一一．－－＇■：－－片．Ｖ．？－、．、二中文摘要目的以山西連翹藥材為研究對(duì)象，并與陜西、河北、河南等產(chǎn)地連翹比較，從遺傳信息、活性成分和生物效應(yīng)等方面進(jìn)行道地性研究。首先，運(yùn)用RAPD-PCR技術(shù)進(jìn)行遺傳多樣性的研究分析并構(gòu)建DNA指紋圖譜；其次，采用GC、HPLC法進(jìn)行不同產(chǎn)地連翹揮發(fā)油、木脂素、苯乙醇苷、黃酮類(lèi)等成分的含量比較研究；建立連翹藥材中多種微量元素的含量測(cè)定方法，進(jìn)行不同產(chǎn)地連翹中微量元素的含

4、量分析；再次，比較不同產(chǎn)地連翹揮發(fā)油和水煎液的體外抗菌、抗甲型流感病毒（H1N1）活性。最后，綜合運(yùn)用DNA、GC、HPLC技術(shù)及一測(cè)多評(píng)法，建立山西連翹藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)體系。方法1.從連翹新鮮果實(shí)中提取DNA，采用RAPD-PCR技術(shù)，從45條RAPD隨機(jī)引物中篩選出多態(tài)性好的引物，用于不同產(chǎn)地連翹的DNA指紋圖譜構(gòu)建，所得數(shù)據(jù)用NTSYS-pc2.1軟件計(jì)算材料間的遺傳相似系數(shù)，應(yīng)用UPGMA法進(jìn)行聚類(lèi)分析；2.采用水蒸氣蒸餾法提取連翹藥材的揮發(fā)油，應(yīng)用氣相色譜法分析檢測(cè)比較主要成分（α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、月桂烯、對(duì)傘花烴、檸檬烯

5、、α-松油醇）的含量；采用回流提取法提取連翹藥材的化學(xué)成分，應(yīng)用高效液相色譜法分析檢測(cè)比較連翹藥材主要成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷A、連翹酯苷B、蘆丁、連翹苷、連翹酯素）的含量。3.采用火焰原子吸收光譜法，濃HNO3-HClO4(4:1)為消解劑，進(jìn)行不同產(chǎn)地連翹微量元素K、Mg、Ca、Na、Mn、Fe、Cu、Zn的含量測(cè)定。4.采用K-B紙片擴(kuò)散法，以抑菌圈直徑為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究不同產(chǎn)地連翹揮發(fā)油及水煎液的體外抗菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、枯草桿菌、白色念珠菌）的活性；采用藥物對(duì)MDCK細(xì)胞毒性和抗甲型流感病毒

6、活性實(shí)驗(yàn)，以SI為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究不同產(chǎn)地連翹藥材的體外抗甲型流感病毒（H1N1）的活性；5.采用氣相色譜法，以檸檬烯為內(nèi)參物，建立其它待評(píng)價(jià)成分（α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、月桂烯、α-松油醇）的相對(duì)校正因子，用于比較一測(cè)多評(píng)法計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值的差異，以相對(duì)誤差驗(yàn)證一測(cè)多評(píng)法用于不同產(chǎn)地連翹揮發(fā)油中6種成分含量測(cè)定的可靠性；采用液相色譜法，以連翹苷為內(nèi)參物，建立其它待評(píng)價(jià)成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷A、連翹酯苷B、蘆丁、連翹酯素）的相對(duì)校正因子，用于比較一測(cè)多評(píng)法計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值的差異，以相對(duì)誤差驗(yàn)證一測(cè)多評(píng)法用于6種

7、成分含量測(cè)定的可靠性。結(jié)果1.連翹藥材遺傳信息研究共篩選出11條多態(tài)性好的引物，PCR擴(kuò)增共獲得80條譜帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出7.27條譜帶，多態(tài)性譜帶67條（比率為83.8%），I可作為連翹藥材資源研究的一種有效分子標(biāo)記；聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，從遺傳相似系數(shù)0.672處劃分，14批連翹藥材可分成兩大類(lèi)：山西獨(dú)聚一類(lèi)，河北、河南、陜西聚為另一類(lèi)。2.采用GC法測(cè)定不同產(chǎn)地連翹揮發(fā)油中主要成分的含量存在明顯差異，山西連翹揮發(fā)油主成分含量整體上高于河南、河北、陜西產(chǎn)地；采用HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地連翹主要成分的含量也存在一定差異，山西產(chǎn)地連翹藥材

8、主要成分（松脂醇-β-D-葡萄糖苷、連翹酯苷B、連翹酯苷A、連翹苷、連翹酯素）含量整體高于河南、河北、陜西。3.采用AAS法測(cè)定連翹各微量元素，該方法準(zhǔn)確度與重復(fù)性良好，不同產(chǎn)地連翹藥材各微量元素存在差異。