水稻ogg1基因的功能分析

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1、．＾二，＇．巧３興中右；片：議議穀纖齡黯戀親稽嶺酵醉：姆掉背：Ｉ’‘；苗掛靜：門(mén)汝詰ｉ，掉安鮮巧茄隸可指吊騙韻兩．謂品ｆ－‘；，．．’課；雖鱗盛誠(chéng)誠(chéng)雖：碟蠟苗接雖燦矜鑽萌罩節(jié)瑞巧片．’發(fā)議當(dāng)讓類鑛羅誦蒼■備黨話境邊巧；■．．＇．‘．－．一，－．．５Ｉ．１＇■？；？？；：．＿．：：Ｖ馨－中碩：±ｒ?qū)W位論文＇打，苗襲察雜３ｉｌ鑽．編鱗議議；Ｉ．Ｖ才．．．語(yǔ)＾為Ｖ；看；：巧？占心與．．？、＞》％．?dāng)U；中＊－也水稽ＯＧＧ／基因的功能分析．；＇．導(dǎo)疆議

2、＇＞’苗＼Ａ直寶稱醬‘護(hù)南Ａ蘆視中Ｖｖ葛艇，訴ｆ研究生姓名倆艷冰￣．■ＩＩ．，山■，ｙ導(dǎo)教師王志龍教授？：指王國(guó)梁教授學(xué)科專業(yè)作物遺傳育種研究方向㈱細(xì)３：程侵震－議ｉ１分類號(hào)￥１密級(jí)ＵＤＣ單位代碼卿齋祭皮丈＃碩±學(xué)位論文水稻ＯＧＧ／基因的功能分析Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆ０（７（７／ｉｎｒｉｃｅ研究生姓名何艷冰指導(dǎo)教師王志龍教授王國(guó)梁教授學(xué)科專業(yè)作物遺傳育種硏究方向作物基因工程論文答辯

3、日期２０１５年６月１３日答辯委員會(huì)主席劉勇論文評(píng)閱人劉愛(ài)民、何錄秋、暴明建二〇—五年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在指導(dǎo)老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證一書(shū)而使用過(guò)的材料。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。／研究生簽名：時(shí)間；０年＾月曰＞／若／關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留

4、、使用學(xué)位論文的規(guī)定：學(xué)校有權(quán)保留，即送交論文的復(fù)印件和電子稿，允許論文被查閱和借閱，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，并同意將由此產(chǎn)生的收益捐贈(zèng)給學(xué)校教育基金會(huì)用于發(fā)展研究生教育。（保密的學(xué)位論文在解密后鱗守此協(xié)議）研究生簽名：時(shí)間：年日／：＾＾＾導(dǎo)師簽名：時(shí)間：）＾（＾年＾月（曰７摘要摘要－ｏｘｏｕａｎ－０ＧＧ１８ｇｉｎｅＤＮＡｌｙｃｏｌａｓｅ為８経基鳥(niǎo)噴嶺ＤＮＡ糖昔酶，主要修復(fù)（ｇ巧）ＤＮＡ氧化損

5、傷，維護(hù)ＤＮＡ及基因組穩(wěn)定，人ＯＧＧ／（ＡＯＧＧ／）突變易誘發(fā)多種腫瘤。已有研究表明擬南芥０ＧＧ７（Ａ０ＧＧ７）與種子成熟和萌發(fā)有關(guān)，影響種子壽命，但尚不清楚水稻０ＧＧ７（化ＯＧＧ／）在ＤＮＡ氧化損傷修復(fù)、逆境脅迫及種子壽命調(diào)控的作７用模式。為剖析化０ＧＧ功能，我們構(gòu)建了化ＯＧＧｉ超表達(dá)、ＲＮＡｉ、亞細(xì)胞定位、原核細(xì)胞表達(dá)及啟動(dòng)子持久表達(dá)載體，獲得了相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因株系。隨后，我們對(duì)轉(zhuǎn)基因株系及有關(guān)材料進(jìn)行分子驗(yàn)證與功能分析，包括啟動(dòng)子活性檢測(cè)，煙草細(xì)胞瞬時(shí)表－達(dá)，脅迫處理與基因表達(dá)及從大腸桿苗純化ＧＳＴＯｓＯＧＧｌ蛋白等。結(jié)

6、果如下：（Ｓ染色分析表明，化０ＧＧＪ起始密碼子前１３３ＯＧＵ１ｂｐ片斷能啟動(dòng)ＧＵＳ基因表達(dá)，具有啟動(dòng)子活性。（２）煙草細(xì)胞共聚焦英光觀察顯示ＯｓＯＧＧｌ定位于細(xì)胞核。（３）農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻日本晴，獲得了超表達(dá)和ＲＮＡｉ沉默轉(zhuǎn)基因Ｔ｜代植株分別為３８株和５４株，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定，已篩選獲得６個(gè)超表達(dá)和９個(gè)ＲＮＡｉ沉默轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系的Ｔ２代種子，我們將鑒定獲得單拷貝的超表達(dá)和ＲＮＡｉ沉默轉(zhuǎn)基因Ｔ２代純系，用于后續(xù)試驗(yàn)分析。°（４）Ｄｔｔ水稻幼苗非生物脅迫（二甲基紫精３０ｊＭｉｍｅｔｈｌａｍｅｈｓ、高溫３８

7、Ｃ、低｜ｙｙ°溫４Ｃ、高鹽２５０ｍＭＮａＣｌ和高滲２０％ＰＥＧ６０００）實(shí)驗(yàn)表明，二甲基紫精誘導(dǎo)的ＯＤ一化ＯＧＧ７表達(dá)與超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，Ｓ）活性變化趨勢(shì)致，高鹽、高溫及低溫處理均在３ｈ處抑制化ＯＧＧ／表達(dá)，高滲透壓處理誘導(dǎo)表一一達(dá)，表明與非生物脅迫有定關(guān)聯(lián)，其作用機(jī)理有待進(jìn)步研究。５（）２４ｈ時(shí)、水稻種子萌發(fā)試驗(yàn)顯示在種子吸漲，日本晴超表達(dá)和ＲＮＡｉ沉默株系的化ＯＧＧ／表達(dá)量最高，表明化ＯＧＧ７可能與水稻種子萌發(fā)有關(guān)。（６）原核表達(dá)ＯｓＯＧＧｌ蛋白及純化了ＯｓＯＧＧｌ，

8、并獲得了ＯｓＯＧＧｌ多克隆抗體，為ＯｓＯＧＧｌ介導(dǎo)的ＤＮＡ氧化損傷修復(fù)功能鑒定提供了基礎(chǔ)