牙鲆（paralichthys olivaceus）dazl基因的克隆、表達和功能初步研究

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1、尚斯儀）寸作々ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ博±學(xué)位論文ＤＯＣＴＯ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ牙巧（八舶知如ｏ／／ｖａｃｅｗ）基因的克隆、論文趣目：表達和功能初步研究Ｃｌｏｎｉｎｇ，ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＳｔｕｄｉｅｓｏｎＦｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＪａｐａｎｅｓｅＦｌｏｕｎｄｅｒ英文涵目：Ｐａｒ幻ｌｉｃｈｔｈｓｏｌｉｖａｃｅｕｓｄａｚＧｅｎｅ（ｙ）ｌ作者：姜佳君巧導(dǎo)教師：張全啟教巧學(xué)位類別：學(xué)術(shù)學(xué)位

2、專業(yè)名稱：海洋生物學(xué)研究方向：海洋生物遺傳學(xué)—，？－ｆ＾■ｔ謹(jǐn)＾乂此論文獻給我敬愛的導(dǎo)師張全啟教授姜佳君牙魚平／／ｃ／？ｆｏ／／Ｖａｃｅｔｙｓ）ｉ／ａｚ／基因的克隆、（表達和功能初步研究學(xué)位論文答辯日期：加５ｇ利斗指導(dǎo)教師簽字：：答辯委員會成員簽字聾ｉＳ為／齊４＾獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研巧工作及取得的研巧成果。據(jù)我所知，，除了文中特別加標(biāo)注和致謝的地方外論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研巧成果，也不包含未獲得（注；

3、如沒有其他需要特別聲明的，本欄可空）或其他教育化構(gòu)的學(xué)位或證書巧用過的材料一。與我同工作的同志對本研巧所做的任何貢獻均己在論文中作Ｔ明確的說明并表示謝意。。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：么（；年ｒ月日學(xué)位論文版權(quán)使用巧權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，并同意Ｗ下事項：１．學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被査閱和借閱。２．學(xué)?？蓪W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可Ｗ采＂用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時授權(quán)清華大學(xué)中國＂

4、學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社用于出版和編入ＣＮＫＩ《中國知識資源總庫》，授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽字：山Ｋ年ｒ月２＾日■簽字日期：簽字日期；７〇（ｒ年ｒ月日＊牙鮮（戶３Ａａ／／ｃ／７ｆ々ｊ／ｓｏ／／Ｖａｃｅｗ）ｏ（ａｚ／基因的克隆、表達和功能初步研究摘要近年來，關(guān)于生殖細(xì)胞的研充被全世界學(xué)者廣泛關(guān)注，除在哺乳動物中有廣泛深入的研究＾式外，在魚類等化等脊椎動物中也逐漸開展起來，并取得很多進展。一一ｅｅｅ

5、ｄｎａｚｏｏｓｒｍ－ＤＡＺＬ（ｄｉａｉＺ家族的成員之，ｌｔｉｐｅｌｋｅ）是ＤＡ同時也是種重要的ＲＮＡ結(jié)合蛋白。現(xiàn)有研巧發(fā)現(xiàn)，從無脊椎動物到脊椎動物，沁Ｚ／特異地表達于雌性和雄性生殖細(xì)胞，可能在生殖細(xì)胞發(fā)育過程發(fā)揮重要作用。不少研巧也一Ｚ從些硬骨魚中鑒定了舶／基因，并對其表達規(guī)律作出了詳細(xì)的探討。本研究克’隆和鑒定了牙鮮（ｆ吟Ｓｏ／ｉｖａｃｅＷ）ｄａｚ／基因，首次在硬骨魚中發(fā)現(xiàn)了其－－ｍＲＮＡ的可變剪接形式．將這兩種牙巧也Ｚ／ｍＲＮＡ稱為化ｔ／ｏｚ／／和尸０沁別／／，探巧了它們在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的表達規(guī)律，并找到

6、了牙鮮ＤＡＺＬ的視ｍＲＮＡ，預(yù)測其功能。，，通過基因克隆等方法Ｚ／，５４Ｂｂ首先，得到了牙鮮如基因全長ｐ包括９’個外顯子和９個內(nèi)含子，９３非，其中外濕子Ｉ僅有ＡＴＧＨ個堿基內(nèi)含子位于一翻譯區(qū)，這些特征與許多ｄｆｌｚ／同源基因是相似的。對加２／等位基因在內(nèi)含子６的序列上有差異。由于外顯子８在轉(zhuǎn)錄或修飾時被測除，導(dǎo)致牙巧沈Ｋ／會產(chǎn)生一ｍＲＮＡ種較短的，與完整的轉(zhuǎn)錄本相比，缺失外顯子８對應(yīng)的５１ｎｕＤＡＺＬ同源多狀序列比對發(fā)現(xiàn)在ＲＮＡ識別基序（ＲＲＭ）中，有７個氨基酸位點可Ｗ將硬骨魚和其它物種區(qū)分開來一。牙鮮ＤＡＺＬ

7、兩種多膚序列與尖吻妒ＤＡＺＬ序列的致度最商，達到８０．６％和８０．４％。轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預(yù)測到ＧＡＴＡ、ＣＥＢＰ和ＳＯＸ等轉(zhuǎn)錄因子可能調(diào)控牙鮮成的轉(zhuǎn)錄。然后，／ｚＷ，通過反轉(zhuǎn)錄ＰＣＲ和實時定量ＰＣＲ驗證了尸０沈如和尸０血都特－異地表達于牙巧的精巢和卵巢，且化血從辦，Ｗ及巧胎發(fā)育的主要時期較化施Ｚ／／的表，達童略高，兩者在巧巢的表達水平都明顯髙于巧巢在化胎發(fā)育到原腸中，期么前的表達皇較商，之后的時期表達水平很低僅在出膜前有瞬時的升離。通過姐織切片原位雜交、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免巧組織化學(xué)等方法，證明化如ｚＷ和＞／〇舶Ｚ－

8、／／／主要定位于巧性和雄性生殖細(xì)胞，兩者對應(yīng)的蛋白產(chǎn)物也具有性腺特異的表這模式，同樣集中表