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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M120104120上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：豬瘟口服疫苗保護(hù)劑篩選及免疫效果評(píng)價(jià)英文題目：ScreeningandevaluationoftheprotectiveadditivesfororalimmunizationofCSFvaccine專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)研究方向：動(dòng)物病毒學(xué)姓名：李星指導(dǎo)教師：劉惠莉二O一五年四月二十日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用
2、的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬
3、于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單備姓名工作單位職稱注上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與教授李家樂(lè)生命學(xué)院研究員張德福上海農(nóng)科院畜牧所易建中上海農(nóng)科院畜牧所研究員俞菊生上海農(nóng)科院信息所研究員上海農(nóng)科院華漕院區(qū)2015年6答辯地點(diǎn)答辯日期機(jī)關(guān)大樓二樓會(huì)議室月5日I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文豬瘟口服疫苗保護(hù)劑篩選及免疫效果評(píng)價(jià)摘要豬瘟(classicalswinefever,CSF)是由豬瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSF
4、V)引起的一種豬的高度接觸性傳染病。該病呈急性或慢性感染，在許多國(guó)家和地區(qū)均有發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的危害。目前，疫苗接種仍是控制豬瘟疫情的主要手段?，F(xiàn)階段我國(guó)使用的豬瘟疫苗主要有豬瘟兔化弱毒株、家兔脾淋組織苗、乳豬腎細(xì)胞苗等注射型疫苗。國(guó)外報(bào)道豬瘟疫苗口服免疫獲得了很好的效果，經(jīng)口服免疫，可減少對(duì)豬只的應(yīng)激且省時(shí)省力。因此研究擬通過(guò)篩選理想的保護(hù)劑，制備可經(jīng)口服途徑免疫的豬瘟疫苗。本研究采用兩種方法制備口服抗原：以豬瘟病毒疫苗株與重組LTRG蛋白及凍干保護(hù)劑配伍，制備凍干抗原；另外利用殼聚糖-海藻酸鈉包埋重組CSFVE2蛋白
5、，制備微囊抗原；兩種抗原分別口服飼喂小鼠，以細(xì)胞免疫指標(biāo)和體液免疫指標(biāo)評(píng)價(jià)抗原的免疫效果，篩選理想的抗原保護(hù)劑。1蛋白抗原包埋及免疫活性檢測(cè)構(gòu)建CSFVE2基因的原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)蛋白，經(jīng)純化后將其作為抗原，與黏膜佐劑蛋白LTRG共同包埋制備殼聚糖-海藻酸鈉微球，然后口服免疫小鼠，檢測(cè)其免疫效果。結(jié)果，包埋E2和LTRG蛋白組小鼠的血清IgG和黏膜IgA水平均顯著高于對(duì)照組，高于E2蛋白包埋組，表明LTRG蛋白作為一種黏膜佐劑，增強(qiáng)了小鼠的免疫反應(yīng)。此外，包埋E2和LTRG蛋白組小鼠的抗體水平顯著高于E2+LTRG蛋白組，說(shuō)明
6、殼聚糖-海藻酸鈉微球作為包埋載體，將抗原進(jìn)行了有效的呈遞，從而誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。2凍干保護(hù)劑篩選及免疫效果評(píng)價(jià)研究配比了不同組分的凍干保護(hù)劑，包括明膠、乳糖和甘氨酸，與黏膜佐劑LTRG蛋白、CSFV按比例混合，經(jīng)優(yōu)化凍干工藝后，制備了4種CSFV的凍干苗。口服免疫小鼠，測(cè)定血清IgG和黏膜IgA抗體效價(jià)。結(jié)果，含明膠和甘氨酸的試驗(yàn)2組和含明膠的試驗(yàn)4組經(jīng)凍干后外觀形態(tài)較好，水溶后呈現(xiàn)澄清狀態(tài)；試驗(yàn)2組和試驗(yàn)4組的凍干苗經(jīng)口服免疫，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的IgG抗體水平極顯著I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文高于CSFV組、CSFV+LT組及
7、其他試驗(yàn)組；二免7天后試驗(yàn)2組小鼠產(chǎn)生的IgA抗體極顯著高于其他組。而且，試驗(yàn)2組小鼠脾臟的IFN-γ和IL-4細(xì)胞因子的表達(dá)量也極顯著高于其他組。表明，在凍干過(guò)程中，明膠和甘氨酸對(duì)豬瘟病毒起到了良好的保護(hù)作用，提高了豬瘟病毒疫苗經(jīng)口服途徑的免疫效果。利用殼聚糖-海藻酸鈉包埋制備重組蛋白微球抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生良好的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫應(yīng)答，證實(shí)包埋蛋白抗原具有良好的免疫效果。配伍不同組分的豬瘟病毒疫苗保護(hù)劑，制備的凍干疫苗，能有效提高機(jī)體免疫抗體水平，證實(shí)制備的凍干保護(hù)劑配方對(duì)豬瘟病毒有較好保護(hù)作用。本研究為豬瘟疫苗凍干保
8、護(hù)劑篩選和不同劑型疫苗的開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：豬瘟疫苗，口服免疫，微球包埋抗原，LTRG蛋白，凍干保護(hù)劑II上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文ScreeningandevaluationoftheprotectiveadditivesfororalimmunizationofCSFv
