番茄硫氧還蛋白基因trxf1的克隆及表達分析

《番茄硫氧還蛋白基因trxf1的克隆及表達分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、分類號：密級：無學號：2012107019單位代碼：10759石河子大學硝士摩依鉿弍番前硫氧還蛋白基因7>x//的克隆及表達分析學位申請人馬展指導教師劉慧英申請學位門類級別農學碩士學科、專業(yè)名稱蔬菜學研究方向設施園藝與無土栽培所在學院農學院中國?新疆?石河子2015年6月分類號：密級：無學號：2012107019單位代碼：10759石河子大學碩士學位論文番茄硫氧還蛋白基因Trxf1的克隆及表達分析學位申請人馬展指導教師劉慧英申請學位門類級別農學碩士學科、專業(yè)名稱蔬菜學研究方向設施園藝與無土栽培所在學院農學院中國·新疆·石河子2015年6月Clon

2、ingandExpressionAnalysisofThioredoxinGeneTrxf1fromTomatoADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByMazhan(Soillesscultivationandhorticulturefacilities)DissertationSupervisor:Prof.Liuhui-yingJune,2015石河子大學學位

3、論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人所呈交的學位論文是在我導師的指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含其他個人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確的說明并表示謝意。研究生簽名：時間：年月日使用授權聲明本人完全了解石河子大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，學校有權保留學位論文并向國家主管部門或指定機構送交論文的電子版和紙質版。有權將學位論文在學校圖書館保存并允許被查閱。有權自行或許可他人將學位論文編入有關數(shù)據庫提供檢索服務。有權將學位論文的

4、標題和摘要匯編出版。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。研究生簽名：時間：年月日導師簽名：時間：年月日摘要本研究以加工番茄品種“雙豐87-5”作為試驗材料，克隆了番茄硫氧還蛋白Trxf1基因，對基因在真核和原核方面進行了表達，進一步對番茄硫氧還蛋白Trxf1基因進行實時熒光定量分析，研究結果如下：1.本研究克隆了番茄Trxf1基因，對該基因編碼的蛋白序列進行了氨基酸同源性和進化樹分析，番茄Trxf1與同為茄科茄屬的馬鈴薯的同源性最高，與模式植物擬南芥的同源性最低；系統(tǒng)進化樹顯示，番茄Trxf1基因與馬鈴薯Trxf1基因的親緣關系最近，與擬南芥等十字

5、花科植物親緣關系最遠。2.利用克隆的Trxf1基因的編碼區(qū)以及真核表達載體pBI121，成功構建了植物表達載體pBI121-Trxf1，采用農桿菌介導法轉化番茄，提取植物DNA，經PCR、RT-PCR分析鑒定，結果表明，植物表達載體已成功整合到番茄基因組中。3.利用克隆的Trxf1基因的編碼區(qū)成功構建原核表達載體pET32a-Trxf1。將重組質粒轉化大腸桿菌Transetta(DE3)宿主菌，經IPTG誘導，獲得相對分子量為25kD的融合蛋白，通過親和層析純化可溶蛋白并獲得Trxf1融合蛋白。用抗His標簽的單抗對純化蛋白進行Westernbl

6、ot鑒定，證明純化的融合蛋白是帶有His標簽的Trxf1蛋白。用可溶性融合蛋白pET32a-Trxf1免疫新西蘭大白兔制備了Trxf1蛋白多克隆抗體Trxf1-KLH，ELISA測定抗體效價為1:6400，WesternBlot檢測抗體特異性，證實Trxf1蛋白的多克隆抗體已制備成功.4.利用實時熒光定量PCR對鹽脅迫下番茄硫氧還蛋白基因Trxf1的時空表達分析，該基因在番茄不同組織中均有表達，且同一時期在葉片中的表達量最高；而在莖和葉器官中，鹽脅迫顯著下調了該基因的表達。外源硒對鹽脅迫下番茄Trxf1及硫氧還蛋白系統(tǒng)相關基因表達的影響研究試驗中

7、，NaCl脅迫處理下調了加工番茄幼苗葉片F(xiàn)d/Trx系統(tǒng)各基因的mRNA轉錄表達，而施用外源硒顯著上調了NaCl脅迫處理期間加工番茄幼苗葉片各基因的mRNA轉錄表達；NaCl脅迫處理上調了加工番茄幼苗葉片NTS系統(tǒng)各基因的mRNA轉錄表達，而施用外源硒顯著下調了NaCl脅迫處理期間各基因的mRNA轉錄表達。關鍵詞：加工番茄；硫氧還蛋白；硒緩解；鹽脅迫；基因克隆；蛋白表達；實時熒光IAbstractInthisstudy,tomatocultivar‘shuangfeng87-5’wasusedasexperimentmaterial,weclon

8、edtheORFofTrxf1genefromTomatoleavesbyPCRmethod,successfullyconstruct