皮蠹科dna條碼分類技術(shù)研究

《皮蠹科dna條碼分類技術(shù)研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、SOOCHOWUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目皮蠢科DNA條碼分類技術(shù)研究研究生姓名李枷霖指導(dǎo)教師姓名蔡平鄭斯竹專業(yè)名稱農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治研究方向昆蟲分類與區(qū)系研究論文提交日期2015年3月蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲

2、明的法律責(zé)任。論文作者簽名:日期：蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所（含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年_

3、月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文c/杳和翁、日期：論文作者簽名:導(dǎo)師簽名:日期：^皮蠹科DNA條碼分類技術(shù)研究中文摘要皮蠹科（Dermestidae）隸屬鞘翅目（Coleoptera）皮蠹總科（Dermestoidea），是一類重要的儲藏物害蟲，食性雜、繁殖力強，危害嚴(yán)重。皮蠹科廣泛分布于世界各地，目前全世界已知1000多種，我國約有100余種。種類準(zhǔn)確識別鑒定是害蟲防治的基礎(chǔ)，皮蠹科分類以成蟲形態(tài)研究為主，幼蟲形態(tài)相似較難區(qū)別，由于形態(tài)研究對鑒定人員的分類知識和經(jīng)驗要求較高，實際工作中種類鑒定困難較大。近年來，快速發(fā)

4、展的分子生物學(xué)技術(shù)為昆蟲種類的快速鑒定提供了新的方法，但皮蠹科昆蟲的分子生物學(xué)研究仍處于初步階段，且目前的分子研究多集中于斑皮蠹屬（Trogoderma），也未有針對皮蠹科內(nèi)相關(guān)屬之間系統(tǒng)的分子進化研究。本文為首次利用DNA條形碼技術(shù)對皮蠹科倉儲害蟲進行分類研究。從DNA提取方法、PCR體系擴增進行試驗探索，構(gòu)建皮蠹科分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，初步建立起皮蠹科基因條形碼數(shù)據(jù)庫，以期利用DNA條形碼技術(shù)實現(xiàn)對皮蠹科害蟲的快速分類鑒定。研究內(nèi)容及結(jié)果包括：1．研究皮蠹科形態(tài)分類，分析重要種類的鑒定特征，攝取各種的背、腹、側(cè)面高清

5、圖輔助鑒定。2．優(yōu)化DNA提取方法，探索了不同預(yù)處理方法對DNA提取效果的影響。經(jīng)過預(yù)處理后，一定程度上減少了基因組DNA的斷鏈，DNA更易擴增長片段，且不同位點擴增效果也較好，其中以9%NaCl溶液3h預(yù)處理后的昆蟲標(biāo)本，利用磁珠法所提DNA的質(zhì)量及PCR擴增效果最佳。2+3．建立適宜的PCR擴增體系。反應(yīng)體系中加入牛血清蛋白并增加Mg濃度，能提高PCR擴增效率及條帶質(zhì)量。設(shè)計的4對外圍巢式引物以A5/A6擴增效果最優(yōu)，最佳退火溫度為49℃?；谛蛄蟹治鼋⒌?對巢式PCR組合，均能適用于較低濃度DNA擴增。4．C

6、OⅠ基因（細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ基因）序列分析。所獲皮蠹科COⅠ基I因擴增序列為前端357bp及后端609bp片段，分別進行拼接校正、比對，利用MEGA分析了各序列保守位點、變異位點、簡約信息位點、自裔位點、各數(shù)據(jù)組堿基組成、堿基頻率、氨基酸組成、密碼子使用情況，計算各物種間的遺傳距離及標(biāo)準(zhǔn)差，轉(zhuǎn)換與顛換比例。并對序列數(shù)據(jù)組系統(tǒng)發(fā)育信號進行檢測，證實序列非隨機數(shù)據(jù)，可為下一步構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹提供依據(jù)保證。5．系統(tǒng)發(fā)育研究。采用最大簡約法（MP）、最大似然法（ML）兩種建樹方法，對皮蠹科COⅠ前、后兩端序列組及其翻譯的氨

7、基酸進行分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。皮蠹科COⅠ基因后端序列片段所包含遺傳信息更豐富，構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹較少發(fā)生偏離，同形態(tài)分類的一致性高于前端片段，更適于作為皮蠹科系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究。6．DNA條形碼初步構(gòu)建。基于各物種間遺傳距離、NJ系統(tǒng)發(fā)育樹、barcodinggap三方面對皮蠹科COⅠ基因前端序列進行分析評價，該片段完全符合DNA條形碼有效性的檢驗標(biāo)準(zhǔn)，可達到種鑒定目的。利用所獲的該段基因初步構(gòu)建了皮蠹科3屬的DNA條形碼。關(guān)鍵詞：皮蠹科；分類；DNA條形碼；COⅠ基因；系統(tǒng)發(fā)育作者:李枷霖指導(dǎo)老師:蔡平鄭斯竹IICl

8、assificationtechniqueresearchofDNAbarcodeinDermestidaeAbstractDermestidaeisakindofimportantstoredpests,polyphagous,stronglyfertileandcauseseriousdamage,belongstoDermestoidea