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《馬傳染性貧血病毒p26蛋白抗原表位鑒定與ac-elisa方法的建立》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、密級:論文編號:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文馬傳染性貧血病毒p26蛋白抗原表位鑒定與AC-EL1SA方法的建立EpitopemappingandAC-ELISADevelopmentofEquineInfectiousAnemiaVirusp26碩士研宄生：常浩指導(dǎo)教師：王曉鈞申請學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向
2、培養(yǎng)單位：哈爾濱獸醫(yī)研究所研宄生院2015年6月密級:論文編號:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文馬傳染性貧血病毒p26蛋白抗原表位鑒定與AC-ELISA方法的建立EpitopemappingandAC-ELISADevelo
3、pmentofEquineInfectiousAnemiaVirusp26碩士研究生：常浩指導(dǎo)教師：王曉鈞申請學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：動物傳染病及其病原分子流行病學(xué)培養(yǎng)單位：哈爾濱獸醫(yī)研究所研究生院2015年6月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEpitopeMappingandAC-ELISADevelopmentofEquineInfectiousAnemiaVirusp26M.S.Candidate：HaoChangSu
4、pervisor:XiaojunWangMajor：MasterofVeterinarianSpecialty:AnimalInfectiousDiseasesAndMolecularEpidemiologyJune2015III摘要馬傳染性貧血（Equineinfectiousanemia,EIA）是一種能夠感染馬、驢和斑馬等馬屬動物的動物性傳染病。它能夠引起馬屬動物貧血、血小板減少、發(fā)熱、消瘦和多器官衰竭等癥狀。EIA由Ligné于1843年在法國首次發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已在美洲、歐洲、中東和南非等世界范圍都有流行，使當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)，賽馬業(yè)
5、和相關(guān)產(chǎn)業(yè)遭受巨大經(jīng)濟損失。解放前期，我國也曾出現(xiàn)EIA流行，但在20世紀(jì)70-80年代由于沈榮顯等人研制出EIAV弱毒疫苗，從而使疫病得到有效控制。馬傳染性貧血病毒（Equineinfectiousanemiavirus,EIAV）是引起EIA的病原體。EIAV屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒，同其他慢病毒如人類免疫缺陷病毒（Humanimmunodeficiencyvirus,HIV）、猴免疫缺陷病毒（Simianimmunodeficiencyvirus,SIV）和貓免疫缺陷病毒（Felineimmunodeficiencyviru
6、s）類似，EIAV包含有Gag、Pol和Env3個主要的結(jié)構(gòu)蛋白和Tat、Rev和S23個非結(jié)構(gòu)蛋白。Gag蛋白作為多聚蛋白，最終可以剪切為基質(zhì)蛋白（MA）、衣殼蛋白（CA）、核衣殼蛋白（NC）和p9蛋白，這些蛋白都作為病毒粒子結(jié)構(gòu)的一部分而存在。EIAV衣殼蛋白又稱為p26蛋白，它的主要功能是自我組裝形成病毒的衣殼結(jié)構(gòu)，其構(gòu)成的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)包裹EIAV的基因組以確保病毒的有效復(fù)制。同時作為病毒感染過程中的主要免疫原性蛋白，p26在不同EIAV株的結(jié)構(gòu)與功能高度保守。并且p26蛋白也是病毒粒子中豐度最高的蛋白之一。本研究通過實驗室
7、制備的2株EIAVp26單克隆抗體:MAb1G11和MAb9H8，利用肽掃描技術(shù)，最終通過免疫印跡試驗（westernblot）鑒定出MAb1G11和MAb9H8所針對p26蛋白的線性表199218位。MAb1G11針對p26蛋白C端的20個氨基酸：KNAMRHLRPEDTLEEKMYAC；MAb9H8則針對N7380端的8個氨基酸：NLDKIAEE。這對于分析p26蛋白結(jié)構(gòu)與功能以及以表位為基礎(chǔ)建立診斷方法提供了依據(jù)，也對基于表位的疫苗設(shè)計具有指導(dǎo)意義。在國務(wù)院頒布的《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中，明
8、確指出要對EIA開展持續(xù)監(jiān)測，對經(jīng)濟娛樂用馬以及高風(fēng)險區(qū)域的馬屬動物進(jìn)行重點監(jiān)測，從而加快推進(jìn)馬傳染性貧血消滅行動。根據(jù)生產(chǎn)實際和國家發(fā)展綱要，建立快速有效的診斷EIA的方法顯得尤為迫切與重要。傳統(tǒng)檢測EIAV的方法是利用p26蛋白檢測EIAV抗體的瓊脂擴散試驗（Agargelimmunodiffusion,AGID），又稱為Coggins試驗。盡管AGID在檢測EIAV高度特異，但是缺乏敏感性。這對于檢測處于慢性期和非明顯期的臨床癥狀的EIA感染尤為不利。同時只能通過肉眼觀察抗原抗體結(jié)合的沉淀線粗細(xì)來對EIAV含量進(jìn)行粗略判斷
9、，并無法對病毒進(jìn)行定量分析。再次，由于試驗周期較長，無法對疾病進(jìn)行快速診斷，使得在生產(chǎn)實踐無法對疫情做到及時有效防控。本研究所鑒定的線性表位分別針對p26蛋白的N端與C端。其所針對的差異表位特性，為本實驗建立抗原捕獲ELISA（AntigenCapture-EL
