dok2對胃癌細胞生物學行為的影響及其與胃癌預后的關系

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1、暨南大學碩士學位論文DOK2對胃癌細胞生物學行為的影響及其與胃癌預后的關系TheinfluenceofDOK2onthebiologicalbehaviorofgastriccancercellsanditsrelationshipwiththeprognosisofgastriccancer作者姓名:焦金霞指導教師姓名及學位、職稱:馬三梅博士副教授學科、專業(yè)名稱:細胞生物學學位類型:學術學位論文提交日期:2015年6月論文答辯日期:2015年5月29日答辯委員會主席:李宏業(yè)論文評閱人:王永飛、尉秀清學位授予單位和日期:暨南大學2015年6月24

2、暨南大學碩士研究生學位論文DOK2對胃癌細胞生物學行為的影響及其與胃癌預后的關系0B摘要研究背景:胃癌是一種消化道惡性腫瘤,包括我國在內(nèi)的東南亞國家屬于胃癌的高發(fā)病率區(qū)域。近年來,80%以上的胃癌診斷發(fā)生在疾病的中晚期階段,用于腫瘤治療的主要手段如手術、放療和化療對部分晚期患者已然無能為力,很容易出現(xiàn)反復發(fā)作或者病灶轉(zhuǎn)移是主要的原因。盡管醫(yī)療科研人員一直致力于改善胃癌的預防、診斷和治療,但是患者的總生存期進展不佳,術后5年生存率僅30%左右。因此,如何抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展和改善腫瘤預后是腫瘤治療的關鍵之一。胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多種因素引發(fā)、多步驟控

3、制且多階段發(fā)生的過程,其主要特征表現(xiàn)為原癌基因的激活和抑癌基因的失活。表觀遺傳學的改變,特別腫瘤相關基因的改變,是腫瘤演變過程中的重要部分。在類染色體8P21.3上的DOK2是本文研究的重點。目前,DOK2作為一種腫瘤抑制基因在卵巢癌、肺腺癌、大腸癌和乳腺癌中均有研究。且DOK2可作為患者根治性切除胃癌后不良預后的一種指標。本文將對胃癌發(fā)生與發(fā)展過程中DOK2基因的作用進行研究。目的:檢測人胃癌組織中DOK2基因的表達,并分析其過表達后對胃癌細胞BGC823增殖能力、克隆形成能力和懸浮非依賴能力的影響,探討其臨床意義。方法:1RT-PCR法檢測D

4、OK2在7個人胃癌細胞株(AGS、BGC-823、SGC7901、MKN28、NCI-N87、MKN45、SNU1)及正常胃組織中的表達。2確定BGC823穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的最適G418殺傷濃度。3構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-DOK2和pcDNA3.1空載體,Lipo2000介導下轉(zhuǎn)染至胃癌細胞BGC-823中,RT-PCR法及WesternBlot檢測DOK2基因在細胞BGC823中的表達。4采用平板集落形成、CCK8法和軟瓊脂克隆形成實驗檢測過表達DOK2基因?qū)GC823生物學行為的影響。5免疫組織化學法檢測116例胃癌組織和18例癌旁組織中DO

5、K2蛋白的表達,并I暨南大學碩士研究生學位論文分析其與胃癌臨床病理學特征及預后的關系。結(jié)果:1DOK2在正常胃組織的mRNA表達水平顯著高于胃癌細胞。2BGC823的G418最佳篩選濃度為500μg/ml。3建立了穩(wěn)定過表達DOK2和空載體對照的BGC823細胞系。4平板集落形成、CCK8法和軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果均顯示過表達的DOK2基因?qū)GC823細胞的生物學行為有顯著抑制作用。5DOK2蛋白的低表達在胃癌組織中占62.93%,DOK2蛋白表達與胃癌臨床病理學特征如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度以及分化程度顯著相關;而患者預后的生存時間與胃癌浸潤深度

6、、DOK2蛋白的表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否遠處轉(zhuǎn)移以及分化程度密切相關。結(jié)論:1DOK2在人胃癌組織及胃癌細胞株中低表達或者表達缺失。2DOK2對胃癌細胞BGC823的生物學行為如增殖、克隆形成和懸浮非依賴能力有顯著的抑制作用。3DOK2表達與胃癌患者預后相關。關鍵詞:胃癌;DOK2;BGC823;生物學行為;預后II暨南大學碩士研究生學位論文TheinfluenceofDOK2onthebiologicalbehaviorofgastriccancercellsanditsrelationshipwiththeprognosisofgastricc

7、ancer1BAbstractBackground:Gastriccancerisagastrointestinalcancer,especiallyinSouth-EastAsiancountries,includingChina.Inrecentyears,morethan80%ofgastriccancerdiagnosisoccurredinthelatestagesofthedisease,theprimarymeansforcancertreatmentsuchassurgery,radiotherapyandchemotherapy

8、inpatientswithadvancedpartalreadypowerless,orrecurrence,metastasis,i

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