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《nnk聯(lián)合lps孵育對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖及相關(guān)基因表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：R734.2密級(jí)：不保密UDC：61學(xué)校代碼：11065碩士學(xué)位論文NNK聯(lián)合LPS孵育對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖及相關(guān)基因表達(dá)的影響陳琛指導(dǎo)教師劉曉萍教授學(xué)科專業(yè)名稱細(xì)胞生物學(xué)論文答辯日期2015年5月31日摘要目的觀察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、4-（甲基亞硝氨基）-3-吡啶-1-丁酮（NNK）對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7細(xì)胞增殖能力及C-myc、NF-κB、iNOS、Arginase、TNFα、IL-1α、IL-6基因表達(dá)的影響。方法體外培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞Raw
2、264.7細(xì)胞，用Realtime-PCR的方法檢測(cè)不同濃度的LPS、NNK刺激Raw264.7細(xì)胞C-mycmRNA的表達(dá)情況，選擇藥物最佳濃度。利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)比所選濃度LPS、NNK及LPS聯(lián)合NNK不同孵育時(shí)間對(duì)Raw264.7細(xì)胞增殖能力的影響；Realtime-PCR方法檢測(cè)C-myc及相關(guān)基因mRNA的表達(dá)情況；WesternBlot技術(shù)檢測(cè)Raw264.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子C-myc蛋白的表達(dá)情況；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)iNOS蛋白的表達(dá)情況；酶聯(lián)免疫技術(shù)定量炎性介質(zhì)TNF-a及IL-6
3、的含量。結(jié)果(1)濃度為10ng/ml、250ng/ml、1μg/ml和4μg/ml的LPS均可上調(diào)Raw264.7細(xì)胞的C-mycmRNA的相對(duì)表達(dá)量；1μg/mlLPS上調(diào)作用較其他組顯著性增強(qiáng)(P<0.05）。濃度為5μM、10μM、25μM和100μM的NNK對(duì)Raw264.7細(xì)胞的C-mycmRNA表達(dá)影響有降低趨勢(shì)，與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性。（2）選擇濃度為1μg/mlLPS+10μMNNK聯(lián)合孵育Raw264.7細(xì)胞,可見(jiàn)24h及36hNNK聯(lián)合LPS孵育組C-mycmRNA的相對(duì)表
4、達(dá)量較LPS組顯著性降低（P24h<0.0001，P36h<0.05）。（3）LPS和LPS聯(lián)合NNK孵育均可降低Raw264.7細(xì)胞的增殖活性（P<0.05），聯(lián)合孵育48h的抑制作用較單獨(dú)LPS孵育略強(qiáng)(P<0.05)。（4）LPS孵育24h、36h、48h均可顯著刺激Raw264.7細(xì)胞NF-κB、Arginase、iNOSmRNA的表達(dá)。單獨(dú)NNK孵育24h、36h、48h可見(jiàn)NF-κB、Arginase、iNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照相比無(wú)差異顯著性。LPS聯(lián)合NNK孵育24h、36h
5、NF-κB、Arginase、iNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量升高；其中孵育24h、36h的NF-κB、孵育36h的iNOSmRNA表達(dá)量顯著高于單獨(dú)LPS刺激組（P<0.05）；LPS聯(lián)合NNK孵育48h，ArginasemRNA表達(dá)量也升高，但低于單獨(dú)LPS刺激組（P<0.01）。（5）LPS及LPS聯(lián)合NNK孵育Raw264.7細(xì)胞24h，IL-1a及IL-6mRNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高，差異具有顯著性（P<0.01）。LPS聯(lián)合NNK組IL-1αmRNA表達(dá)量顯著高于LPS組(P<0.05)。
6、（6）WesternBlot結(jié)果顯示NNK、LPS、LPS聯(lián)合NNK組孵育24h和48hC-myc蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化。(7)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示LPS及LPS聯(lián)合NNK孵育48h，iNOS蛋白表達(dá)量明顯升高。（8）LPS和LPS聯(lián)合NNK聯(lián)合孵育Raw264.7細(xì)胞24h、48h，其IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)均較對(duì)照組顯著升高，LPS聯(lián)合NNK孵育48hIL-6蛋白表達(dá)量高于LPS組（P<0.01），LPS聯(lián)合NNK孵育24hTNF-α蛋白表量達(dá)低于LPS組（P<0.05）。結(jié)論NNK本身對(duì)巨
7、噬細(xì)胞的增殖、向M1型轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)無(wú)明顯作用。LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞C-myc、NF-κB、iNOS、Arginase、IL-1a、IL-6mRNA的急劇升高，抑制該細(xì)胞的增殖、促其向M1型轉(zhuǎn)化。LPS聯(lián)合NNK聯(lián)合孵育強(qiáng)化了LPS激活NF-κB、IL-1α等基因作用、弱化了Arginase基因的表達(dá)；進(jìn)一步促進(jìn)了M1型巨噬細(xì)胞的形成和激活，進(jìn)而刺激M1細(xì)胞產(chǎn)生和分泌IL-1α、iNOS等，增加NO的合成；造成正常細(xì)胞DNA的損傷增加，阻礙DNA修復(fù)，誘導(dǎo)基因突變，刺激肺癌形成。碩士研究生：
8、陳琛(細(xì)胞生物學(xué))導(dǎo)師：劉曉萍教授關(guān)鍵詞：脂多糖；4-（甲基亞硝氨基）-3-吡啶-1-丁酮；細(xì)胞增殖；巨噬細(xì)胞EFFECTOFLPSANDNNKONTHEPROLIFERATIONANDRELATEDGENEEXPRESSIONOFRAW264.7CELLSAbstractObjectiveToobservetheeffectofLPSandNNKontheproliferationandC-mycgeneandotherrelatedgene(NF-κB、iNOS、Arginas
