亞低溫對(duì)顱腦創(chuàng)傷后受體相互作用蛋白激酶-1及其壞死性凋亡通路表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

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1、分類(lèi)號(hào)：R651.1學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012602631碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：亞低溫對(duì)顱腦創(chuàng)傷后受體相互作用蛋白激酶-1及其壞死性凋亡通路表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究TITLEEffectofMildHypothermiaTreatmentonRatRIPK-1ExpressionandAnalysisofRIPK-1SignalingPathwaysAlteredFollowingTraumaticBrainInjury一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)神經(jīng)外科

2、論文作者：張海博指導(dǎo)教師：張賽教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二零一五年五月分類(lèi)號(hào)：R651.1學(xué)校代碼：10062密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012602631學(xué)位類(lèi)別：科學(xué)學(xué)位?專業(yè)學(xué)位?學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：亞低溫對(duì)顱腦創(chuàng)傷后受體相互作用蛋白激酶-1及其壞死性凋亡通路表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究TITLEEffectofMildHypothermiaTreatmentonRatRIPK-1ExpressionandAnalysisofRIPK-1SignalingPathwaysA

3、lteredFollowingTraumaticBrainInjury一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)神經(jīng)外科論文作者：張海博指導(dǎo)教師：張賽教授導(dǎo)師組成員：涂悅教授程世翔講師天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二零一五年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：張海博

4、日期：2015年5月22日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。保密，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本論文屬于不保密。（請(qǐng)?jiān)谙鄬?duì)應(yīng)的方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：張海博日期：2015年5月22日導(dǎo)師簽名：張賽日期：2015年5月22日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要研究目的：本實(shí)驗(yàn)利用可控性

5、皮質(zhì)損傷裝置（CCI）裝置成功建立大鼠顱腦創(chuàng)傷模型，及可控性細(xì)胞損傷裝置（CIC-II）裝置成功建立顱腦創(chuàng)傷的細(xì)胞模型并運(yùn)用此模型進(jìn)行：(1)探討亞低溫對(duì)顱腦創(chuàng)傷（TBI）后大鼠腦組織受體相互作用蛋白激酶-1（RIPK-1）表達(dá)的影響。（2）對(duì)RIPK-1介導(dǎo)的壞死性凋亡通路中神經(jīng)細(xì)胞壞死性凋亡的分子機(jī)制進(jìn)行探索并揭示重要蛋白在通路中的相互作用。（3）研究亞低溫對(duì)壞死性凋亡通路保護(hù)作用的分子機(jī)制。（4）FADD在RIPK-1介導(dǎo)的壞死性凋亡通路中的作用。研究?jī)?nèi)容與方法：本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分：即動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分和細(xì)胞

6、實(shí)驗(yàn)部分。實(shí)驗(yàn)一：利用可控性皮質(zhì)損傷裝置（CCI）建立大鼠顱腦創(chuàng)傷模型并給予多種方法系統(tǒng)評(píng)價(jià)造模準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)二：應(yīng)用可控性細(xì)胞損傷裝置（CIC-II）裝置成功建立顱腦創(chuàng)傷的細(xì)胞模型并就細(xì)胞形態(tài)學(xué)等特征進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)研究。實(shí)驗(yàn)一：健康成年Wistar大鼠40只，將其隨機(jī)分成4組：Sham組（假手術(shù)）開(kāi)骨窗不予打擊、傷后不給予亞低溫治療，Sham+HT組（假手術(shù)+亞低溫）開(kāi)骨窗不予打擊而后亞低溫干預(yù)8小時(shí)，TBI組（手術(shù)）開(kāi)骨窗后應(yīng)用CCI裝置打擊致傷，參數(shù)設(shè)置為：速率（v）4m/s，深度（d）2mm，持續(xù)時(shí)間（t

7、）120ms，TBI+HT組（手術(shù)+亞低溫）開(kāi)骨窗，CCI打擊致傷（前后打擊參數(shù)保持一致），傷后采取亞低溫治療時(shí)間統(tǒng)一定為8小時(shí)，待動(dòng)物蘇醒后，在傷后1天和2天進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷綜合評(píng)分（n=10），后進(jìn)行親神經(jīng)特殊染料（甲苯胺藍(lán)）的腦組織染色實(shí)驗(yàn)；Western-blot測(cè)定大鼠皮層RIPK-1,RIPK-3,FADD,PARP-1,Caspase-3,Caspase-8,TNF-α,TRAIL,andFasL的表達(dá)；Real-timePCR測(cè)定大鼠皮層RIPK-1,RIPK-3,FADD,PARP-1,Ca

8、spase-3,Caspase-8,TNF-α,TRAIL,andFasL的mRNA表達(dá)；腦組織HE染色、免疫組化染色；腦組織DNA免疫熒光實(shí)驗(yàn)；透射電子顯微鏡檢測(cè)腦組織壞死后亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化；Fluoro-Jade.C(FJC)腦組織染色；大鼠腦組織血流量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)二：SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，應(yīng)用CIC-II梯度打擊SH-SY5Y并評(píng)價(jià)，常規(guī)培養(yǎng)胰酶消化SH-SY5Y細(xì)胞，準(zhǔn)備生物硅