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《天山雪蓮類黃酮相關(guān)基因的克隆及功能分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012103050單位代碼：10759石河子大學(xué)磧士#佐儉夂天山雪蓮類黃酮相關(guān)基因的克隆及功能分析學(xué)位申請(qǐng)人張麗指導(dǎo)教師祝建波研究員申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類級(jí)別理學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向植物基因工程所在學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院中國(guó)?新疆?石河子2015年6月分類號(hào)：密級(jí)：學(xué)號(hào)：2012103050單位代碼：10759石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文天山雪蓮類黃酮相關(guān)基因的克隆及功能分析學(xué)位申請(qǐng)人張麗指導(dǎo)教師祝建波研究員申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類級(jí)別理學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向植物基因工程所在學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院中國(guó)·
2、新疆·石河子2015年6月CloningandfunctionalanalysisofflavonoidsrelatedgenesofSaussureaInvolucrateKar.etKirADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofNaturalScienceByZhangLi(BiochemistryandMolecularBiology)DissertationSupervi
3、sor：Prof.ZhuJian-boJun，2015石河子大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在我導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個(gè)人已經(jīng)發(fā)表或k寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。研究生簽名時(shí)間：年6月使用授權(quán)聲明本人完全了解石珂子大學(xué)有關(guān)保留、使用孚位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主贊部門(mén)或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版。治權(quán)將學(xué)位論文在學(xué)校圍書(shū)館保存并允許鈹查
4、閱。有權(quán)自行戒丨午叮他人將學(xué)位論X編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)提俱檢索服務(wù)。響權(quán)將學(xué)位論X的標(biāo)題和摘要匯編出極％保密的學(xué)位論X在解密后述用木IX定-砑究生簽名:NE：^lbB導(dǎo)師簽名：時(shí)間：年6月IC曰摘要目的：天山雪蓮次生代謝物種類非常復(fù)雜，其主要藥理活性的化合物有黃酮、生物堿和多糖類，其中黃酮中的類黃酮為自然界藥用植物中的主要活性成分之一，具有較強(qiáng)的藥理作用，屬于植物次級(jí)代謝產(chǎn)物。但是由于其自然生長(zhǎng)速度緩慢，加之人們對(duì)其過(guò)度采挖，現(xiàn)有的野生資源瀕臨枯竭，生物多樣性受到嚴(yán)重的威脅，因此，尋找野生雪蓮的替代品，滿足市場(chǎng)需求成了一個(gè)亟待解決的課題。方法
5、：本研究用RT-PCR方法克隆SikP和SikTTG1基因并對(duì)其生物信息學(xué)進(jìn)行分析，構(gòu)建植物表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化天山雪蓮和番茄，用PCR和RT-PCR鑒定轉(zhuǎn)基因植株，分別對(duì)轉(zhuǎn)基因天山雪蓮葉片和番茄葉片的類黃酮含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：（1）從天山雪蓮葉片cDNA中成功克隆出SikP基因，該基因含有一個(gè)783bp編碼261個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框；SikP基因與水母雪蓮的SmP基因序列同源性達(dá)96.5%，氨基酸同源性96.9%，所編碼蛋白理論等電點(diǎn)為7.64，為堿性氨基酸，相對(duì)分子量為29086.5Da，不存在跨膜域，為親水性較強(qiáng)的蛋白，
6、不穩(wěn)定參數(shù)為61.23，屬于不穩(wěn)定蛋白。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明天山雪蓮SikP與水母雪蓮SmP蛋白親緣關(guān)系最近并在同一分支上。（2）SikTTG1基因含有一個(gè)1011bp編碼337個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框與水母雪蓮的SmTTG1基因序列同源性達(dá)97.14%，氨基酸同源性為95.55%，所編碼的蛋白質(zhì)具有WD40結(jié)構(gòu)域，屬于WD40家族成員，等電點(diǎn)為4.82，為酸性氨基酸，相對(duì)分子量37692.3Da，不存在跨膜區(qū)域，為親水性蛋白，不穩(wěn)定參數(shù)為52.10，屬于不穩(wěn)定蛋白。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明天山雪蓮SikTTG1與水母雪蓮SmTTG1蛋白親緣關(guān)系最近并在同
7、一分支上。（3）本研究將SikP和SikTTG1基因成功構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI121-SikP和pCAMBIA2300-SikTTG1。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化天山雪蓮和番茄，經(jīng)PCR和RT-PCR鑒定，獲得番茄。（4）分別測(cè)量轉(zhuǎn)基因天山雪蓮葉片和番茄葉片的類黃酮含量，將其與對(duì)照作比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)SikP基因的天山雪蓮類黃酮含量是對(duì)照組的9.85倍，轉(zhuǎn)SikP基因的番茄葉片類黃酮含量是對(duì)照組的5.4倍，轉(zhuǎn)SmTTG1基因的番茄葉片類黃酮含量是對(duì)照組的3.95倍。結(jié)論：綜上所述，說(shuō)明天山雪蓮Myb轉(zhuǎn)錄因子SikP基因和WD40轉(zhuǎn)錄因子SmTT
8、G1基因?qū)χ参锎紊x具有重要的調(diào)控作用，能夠有效地提高類黃酮的含量。關(guān)鍵詞：天山雪蓮，類黃酮，轉(zhuǎn)錄因子，SikP基因，SikTTG1基因IAbstractObject:Saussureainvolucra
