水稻兩個mirna靶基因功能分析載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化

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1、一,聲.'.I^、、'.‘.瓦-*?.、;分類號學號S2012291:,四川農(nóng)業(yè)大學碩:±1學位論文水稻兩個miRNA帶基因功能分析載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化民icetwocarrierconstructio打ofmiRNAtargetenesfunctionanalysisandeneticggtransformation.、->—'?ttf李敬?*.-?.'-?指導教師王文明研究員導師組王義明李燕巧晶四川農(nóng)業(yè)大學學科

2、專業(yè)植物病理學研究方向植物抗病性及利用2015年6月;—、’、‘:-一-.yr戶一-V1>’’’:V.;非4,;,巧,—論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行研究工作所取得的,成果。盡我所知,除了文中特別加W標注和致謝的地方外學位論文中不包含其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學或其它教育機一構(gòu)的學位或證書所使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。"如研究生簽名

3、:^^嫁^/戶年(月《日關于論文使用授權(quán)的聲明,目本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學有關保留:學校有權(quán)、使用學位論文的規(guī)定P保留并向國家有關部口或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可1^^采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學可W用不同方式在不同媒體上發(fā)表。、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容?^本論文不保密。□本論文保密,在年解密后適用本授權(quán)。_""(請在W上□內(nèi)劃V)S研究生簽名:毒和如皆年谷月曰導師簽名:W年月日目錄摘要5Abstract6符號

4、說明71文獻綜述81.1植物的抗病性81丄1病原相關分子模式所激發(fā)的免疫反應(PTI)91丄2效應因子激發(fā)的免疫反應(ETI)91丄3植物獲得性抗性(SAR)111.1.14水稻中與稻癌病相關的先天免疫反應21.2民NA干涉技術(shù)研究151.2.1艮NA16i的作用機理.22RNA11.i的技術(shù)特點81.3Mi燈oRNA的研究進展20icroRNA的發(fā)現(xiàn)20O.lMI.3.2MicroRNA的合成201.3.3MicroRNA的作用機制2214M

5、coRNA在植物中的作22.3.ir用1.4論文選題依據(jù)及研究的目的意義232材料與方法242.1實驗材料242丄1水稻材料242.1.2遺傳轉(zhuǎn)化體系中菌株和質(zhì)粒載體2412丄3分子生物學試劑242丄4主要實驗儀器設備252丄5培養(yǎng)基及其抗生素252;26.2實驗方法26.2.1水稻材料培養(yǎng):22.2.2水稻DNA提取262.2.3水巧總RNA提取,反轉(zhuǎn)為cDNA262.2.3.1水稻總RNA提取的準備262.2.3.2水稻總RNA提取步驟26

6、2..233RNA純化及反轉(zhuǎn)錄272.8.24相關克隆載體的構(gòu)建22.2.4.1目標基因的克隆及回收純化282.2A2大腸桿菌感受態(tài)的制備巧2.2A3大腸桿菌的轉(zhuǎn)化292.2.4.4農(nóng)巧菌感受態(tài)的制備312.2A5農(nóng))31桿菌的轉(zhuǎn)化(電轉(zhuǎn)2.2A6農(nóng)桿菌的菌落PCR檢測312.2.5本生煙瞬時表達322.2.6農(nóng)桿菌介導的水稻遺傳轉(zhuǎn)化322..2.61主要涉及的培養(yǎng)基322.2.6.2水稻愈傷組織的誘導332.2.6.3轉(zhuǎn)化愈傷組織332.2.7對遺傳轉(zhuǎn)化產(chǎn)

7、生的水稻植株進行陽性鑒定342.2.7.1潮霉素初篩3422.2J.2水稻轉(zhuǎn)基因植株經(jīng)行PC民鑒定343結(jié)果與分析353.1miRNA160禪基因LOCOs06g47150和miRNAWS鞭基因LOCOs0448410__g過表達載體的構(gòu)建及亞細胞定位363丄1載體構(gòu)建%3丄2亞細胞定位373.2mHlNA160LOCOs0647150mLOC鞭基因和iRNA398靴基因Os04484]0_g_g過表達突變體載體的構(gòu)建393.3miRNA160祀基因

8、LOCOs0647150和miRNA398鞭基因LOCOs0448410_g_gRNAi載體的構(gòu)建403.4農(nóng)桿菌介導的水稻遺傳轉(zhuǎn)化4131.4.轉(zhuǎn)

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