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《長(zhǎng)江、黃河、遼河水系中華絨螯蟹野生群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M120101083上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文長(zhǎng)江、黃河、遼河水系中華絨螯蟹野生群體遺題目：傳多樣性的微衛(wèi)星分析Thepopulationgeneticdiversityanalysison英文題目：threewildstocksofEriocheirsinensisfromdifferentwatersystemsusingmicrosatellitemarkers專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：中華絨螯蟹遺傳育種姓名：劉皓指導(dǎo)教師：成永旭，吳旭干二〇一五年三月十八日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱備注答辯地點(diǎn)答辯日期上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)
2、性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃
3、描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，本學(xué)位論文屬于在年解密后適用本版權(quán)書。不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文長(zhǎng)江、黃河、遼河水系中華絨螯蟹野生群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析摘要與傳統(tǒng)的遺傳標(biāo)記不同，分子標(biāo)記可以從DNA水平上體現(xiàn)出物種的遺傳多樣性，其中微衛(wèi)星DNA標(biāo)記由于具備諸多優(yōu)點(diǎn)，通常被認(rèn)為是群體遺傳多樣性分析的理想標(biāo)記。微衛(wèi)星標(biāo)記用于中華絨螯蟹（Eriocheirsinensis）群體遺傳學(xué)分析的研究已有一些報(bào)道，然而之前報(bào)道由于采樣時(shí)間較早、水域不同加之中華絨螯蟹（河蟹）野生群體的生存繁衍處在動(dòng)態(tài)變化中，長(zhǎng)江、黃河、遼河三個(gè)主產(chǎn)
4、水系的遺傳現(xiàn)狀尚存在不確定性，進(jìn)一步的種質(zhì)評(píng)價(jià)工作有待進(jìn)行。本研究針對(duì)中華絨螯蟹種群遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析這一目標(biāo)，為更好的開(kāi)展微衛(wèi)星分子標(biāo)記在河蟹種群遺傳分析上的應(yīng)用，首先從優(yōu)化DNA提取方法入手，然后比較優(yōu)選微衛(wèi)星PCR產(chǎn)物分型技術(shù)，最后通過(guò)對(duì)長(zhǎng)江、黃河和遼河三個(gè)水系野生河蟹種群的遺傳結(jié)構(gòu)加以分析，以期獲得河蟹主產(chǎn)水系野生群體的當(dāng)前的種質(zhì)資源狀況，對(duì)河蟹遺傳育種工作提供基礎(chǔ)資料。1.為優(yōu)化中華絨螯蟹基因組DNA提取方法，本試驗(yàn)采用酚-氯仿法和吸附柱型試劑盒分別對(duì)中華絨螯蟹的鰓、肌肉、血淋巴液和剛毛4種組織進(jìn)行DNA提取，并從純度、濃度、片段完整性及微衛(wèi)星標(biāo)記PCR擴(kuò)增效果共4個(gè)方面評(píng)價(jià)提
5、取DNA的質(zhì)量。結(jié)果顯示：使用酚-氯仿法提取得到的DNA片段比用試劑盒提取的更完整，且DNA的濃度較高，但純度稍低；兩種提取方法，剛毛和血淋巴液中的DNA純度都高于鰓和肌肉，4種組織中的DNA含量依次為鰓>肌肉>剛毛>血淋巴液，未剪碎剛毛中未能提取到基因組DNA；微衛(wèi)星標(biāo)記PCR產(chǎn)物的電泳條帶表明，兩種提取方法下4種組織中提取的DNA質(zhì)量均可滿足微衛(wèi)星標(biāo)記的應(yīng)用要求。最終建立起一種簡(jiǎn)便的非損傷性中華絨螯蟹的采樣及其DNA提取方法，這對(duì)于進(jìn)行中華絨螯蟹遺傳育種和分子標(biāo)記研究等方面具有積極作用。2.為對(duì)比熒光標(biāo)記分型技術(shù)和非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)微衛(wèi)星等位基因分型的效果，本試驗(yàn)選擇6對(duì)微衛(wèi)星引
6、物，對(duì)60個(gè)中華絨螯蟹個(gè)體的總DNAI上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增。熒光標(biāo)記法共檢測(cè)出等位基因129個(gè)，平均每個(gè)位點(diǎn)21.5個(gè)等位基因，聚丙烯酰胺凝膠電泳共檢測(cè)出等位基因174個(gè)，平均每個(gè)位點(diǎn)29個(gè)等位基因。對(duì)位點(diǎn)Esin67的PCR產(chǎn)物分別進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)熒光標(biāo)記法的重復(fù)率為100%，而聚丙烯酰胺凝膠電泳法兩次結(jié)果存在較大差異，該結(jié)果證實(shí)了熒光標(biāo)記法在檢測(cè)的可靠性顯著的高于聚丙烯酰胺凝膠電泳。對(duì)兩種方法的檢測(cè)效率和經(jīng)濟(jì)成本的分析表明，熒光標(biāo)記法雖然成本較高，但效率亦高于聚丙烯酰胺凝膠電泳法。建立單重PCR產(chǎn)物的多重毛細(xì)管電泳分型技術(shù)是提高效率、降低成本的有效途徑。3.利用2
7、3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，對(duì)3個(gè)水系（長(zhǎng)江、黃河、遼河）河蟹的野生群體進(jìn)行遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析。共檢測(cè)到745個(gè)等位基因，各位點(diǎn)平均等位基因數(shù)為31個(gè)。遺傳多樣性分析顯示，23個(gè)微衛(wèi)星座位的平均多態(tài)信息含量（PIC）為0.894，其中22個(gè)為高多態(tài)性位點(diǎn)（PIC>0.5）。所有位點(diǎn)平均觀測(cè)雜合度為0.736，平均期望雜合度為0.903，有多個(gè)座位在不同群體中偏離哈代-溫伯格平衡，總體上處于雜合子缺失狀態(tài)。3個(gè)群體均
