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1、授予單位代碼１００８９巧＾＾鐘大這ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ碩±學(xué)位論文在職科學(xué)學(xué)位Ｓｉｒｔｌ／ＦｏｘＯｌ在高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細(xì)胞調(diào)亡中的作用學(xué)位申請(qǐng)人：張瑞導(dǎo)師：史永紅教授專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)二級(jí)學(xué)院：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院２０１５年１０月河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師（或指導(dǎo)小姐）的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表
2、一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)與學(xué)位論義主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均巧河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名導(dǎo)師簽章三級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章＇＇＇＞（７／ｊｒ年／／月之Ｈ河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加＾１＾１標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果。，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：導(dǎo)師簽章：又口？ＪＴ年／／月Ｊ＾日Ｉ
3、目錄中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4研究論文SIRT1/FOXO1在高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細(xì)胞凋亡中的作用前言………………………………………………………………………7材料與方法………………………………………………………………8結(jié)果……………………………………………………………………14附圖……………………………………………………………………16討論……………………………………………………………………23結(jié)論……………………………………………………………
4、………24參考文獻(xiàn)………………………………………………………………25綜述Sirtuin與腎臟疾病………………………………………………28致謝…………………………………………………………………………38個(gè)人簡(jiǎn)歷……………………………………………………………………39中文摘要SIRT1/FOXO1在高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細(xì)胞凋亡中的作用摘要目的：糖尿病腎病(diabeticnephropathyDN)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥。以糖尿病腎病為原發(fā)病的終末期腎衰發(fā)病率逐年上升。在我國(guó)，每年花費(fèi)大量的人力、物力、財(cái)力維持這些病人的治療。然而糖尿病腎病
5、的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，臨床上治療糖尿病腎病有待于新的突破。目前，雖然對(duì)于DN的發(fā)病機(jī)制仍不清楚，但是大量研究證實(shí)氧化應(yīng)激在DN的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了非常重要的作用。糖尿病的機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，促進(jìn)了臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損害和凋亡的發(fā)生。ROS的產(chǎn)生與高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞(mesangialcell，MC)凋亡密切相關(guān)。而FOXO1(ForkheadBox,FOX)是PI3K/AKT信號(hào)通路中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在氧化應(yīng)激環(huán)境中，PI3K/AKT信號(hào)通路會(huì)促使FOXO1發(fā)生去磷酸化作用并增加其結(jié)合下游因子DNA的能力，從而定位于細(xì)胞核，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性
6、。FOXO1與氧化應(yīng)激及氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡等密切相關(guān)。然而，到目前為止，有關(guān)FOXO1與系膜細(xì)胞凋亡的具體關(guān)系以及相關(guān)作用機(jī)制還未見報(bào)道。在本項(xiàng)目中我們擬通過體外培養(yǎng)細(xì)胞，采用FOXO1小干擾RNA上調(diào)FOXO1表達(dá)，觀察SIRT1/FOXO1與腎臟系膜細(xì)胞凋亡的關(guān)系。為了研究在慢性腎臟疾病中腎臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。我們進(jìn)一步檢測(cè)了凋亡相關(guān)蛋白和部分凋亡相關(guān)信號(hào)通路。為慢性腎臟疾病的治療提供新思路。方法：構(gòu)建FOXO1的siRNA干擾質(zhì)粒，使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑將FOXO1siRNA質(zhì)粒和對(duì)照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染MM
7、Cs，G418篩選穩(wěn)定的MMCs細(xì)胞系。以正常糖濃度（NG）培養(yǎng)的MMCs為對(duì)照，以HG刺激MMCs。TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)目，Westernblot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SIRT1、FOXO1、Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3、SOD1、SOD2、P47,NOX4、β-actin蛋白的表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞FOXO1、Bax、Bcl-2的mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1高糖對(duì)FOXO1表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組FOXO1的表達(dá)明顯減少。FOXO11中文摘要siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能明顯上調(diào)高糖誘導(dǎo)的FOXO1表達(dá)情況
8、。證實(shí)FOXO1siRNA對(duì)MMC的FOXO1上調(diào)效果明顯。2敲低FOXO1表達(dá)明顯抑制高糖誘導(dǎo)的MMC凋亡。TUNEL結(jié)果顯示，與NG組相比，HG組MMC凋亡明顯增多，與HG組
