云南松口蘑的遺傳多樣性研究

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1、第52卷第6期2007年3月論文云南松口蘑的遺傳多樣性研究①①②②②②①①③*沙濤張漢波丁驊孫李宗菊程立忠趙之偉張亞平(①云南大學生物資源保護與利用國家重點實驗室培育基地,昆明650091;②云南大學生命科學學院,昆明650091;③中國科學院昆明動物研究所細胞與分子進化重點實驗室,昆明650223.*聯(lián)系人,E-mail:zhangyp1@263.net.cn)摘要對分布于云南省9個地市13個縣的56個松口蘑(Tricholomamatsutake)子實體進行了ITS序列、IGS序列和反轉錄轉座

2、子PCR圖譜比較分析,發(fā)現(xiàn)ITS序列只有一種單倍型,IGS序列有3種單倍型,反轉錄轉座子PCR圖譜群體間的多態(tài)性不顯著.對比我國東北和日本松口蘑的研究結果發(fā)現(xiàn),云南松口蘑的遺傳多樣性較低,云南松口蘑和日本松口蘑同源,但松口蘑可能不是起源于云南.關鍵詞松口蘑ITS1IGS1反轉錄轉座子間擴增多態(tài)性松口蘑(Tricholomamatsutake(S.ItoetS.Imai)蘑的IGS1限制性片段長度多態(tài)性(RFLPh)較高.反[1,2]Singer)俗稱松茸,是外生菌根真菌,主要分布轉錄轉座子(ret

3、rotransposon)以高拷貝在真菌基因組在東亞的日本、韓國和中國等國家.由于其味道鮮中廣泛分布,可以通過縱向和橫向分別在世代之間美、營養(yǎng)價值十分豐富,是我國著名的食用真菌.近和不同種之間傳遞,同一家族的反轉錄轉座子具有年來,由于國際市場需求量很大,我國每年出口創(chuàng)高度的異質性.因此,反轉錄轉座子間擴增多態(tài)性匯金額達5000多萬美元.由于松口蘑目前尚不能實(inter-retrotransposon-amplifiedpolymorphism,IRAP)現(xiàn)人工栽培,所有出口產(chǎn)品全靠自然采收.加上

4、采收已成功地應用于多種生物,如大麥的遺傳多樣性分[9][10]管理不當,種質資源量正快速降低,已被列為國家二析.Murata等人發(fā)現(xiàn)亞洲及美洲松口蘑的反轉錄級瀕危保護物種.轉座子呈現(xiàn)更高的多態(tài)性.云南是我國松茸的主產(chǎn)區(qū)之一,全省范圍內都本研究結合了上述3種遺傳標記,研究云南省松口蘑不同地理群體間以及與日本松口蘑的遺傳差異,有分布,其松口蘑年出口量約占全國的1/4,年出口為進一步探索松口蘑與不同宿主植物間的共生機理,產(chǎn)值約3.2億元人民幣,是云南省的主要出口創(chuàng)匯農[3]進而為生態(tài)恢復區(qū)接種松口蘑菌根

5、菌,實施人工促產(chǎn)品之一.由于云南省極為多樣的氣候和植被類繁技術奠定基礎.型為松口蘑的生長提供了豐富多樣的生態(tài)位,一些學者認為我國西南是松茸群的多度中心、多樣性中心1材料及方法[4]和現(xiàn)代分布中心,因此也是研究松口蘑的起源和(ⅰ)材料.松口蘑樣品見表1和圖1,假松口蘑遺傳多樣性的關鍵地區(qū).為了制定科學的保護對策,(TricholomabakamatsutakeTF9)來源于昆明市嵩明縣.了解云南松口蘑不同地理類群(居群)間的親緣關系(ⅱ)PCR引物.ITS引物:ITS4(5′-TCCTCCG-和遺傳

6、差異十分必要.CTTATTGATATGC)/ITS5(5′-GGAAGTAAAAGTC-[11]GTAACAAGG-3′);IGS引物:5SA-Anderson(5′-ITS(internaltranscribedspacer)目前被廣泛應用[5]CAGAGTCCTATGGCCGTGGAT-3′)/CNL12(5′-CT-于不同水平的系統(tǒng)發(fā)育、進化和分類研究.瑞典農[8]GAACGCCTCTAAGTCAG-3′);反轉錄轉座子引物:業(yè)科學大學(Uppsala)對亞洲松口蘑(Tricholomama

7、-pS48(5′-GAGGTGGGGAAAAATATGGGACGAAC-tsutake)以及瑞典松口蘑(Tricholomanauseosum)進行3′)/pL281(5′-CTTCACATATACTGGGCATCAGCA-[10]了DNA的分析比較,發(fā)現(xiàn)兩地區(qū)的松口蘑ITS序列有AGGG-3′).以上引物由上海博亞生物技術有限公[6]司合成.99%~100%的吻合度.IGS(intergenicspacer)是rDNA中基因進化速度最快的區(qū)域,常用來進行種內(ⅲ)DNA提取方法.子實體總DNA的

8、提取采[7][8]用CTAB法.群體比較.Guerin-Laguette等人發(fā)現(xiàn)了日本松口2007-01-04收稿,2007-02-26接受“十五”國家科技攻關計劃(批準號:2001BA707B01)、國家自然科學基金(批準號:30621092)和云南省科技廳(批準號:2005PG11)資助項目668www.scichina.com論文第52卷第6期2007年3月涂Amp/IPTG/X-Gal的LB平板,挑白斑檢測目的片段并進行DNA序列測定.(ⅵ)DNA序列測定與分析.ITS和I