使用安捷倫1260Infinity液相色譜和柱后光

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1、使用安捷倫1260Infinity液相色譜和柱后光化學(xué)衍生方法同時(shí)測定四種黃曲霉毒素應(yīng)用報(bào)告食品&農(nóng)業(yè)作者肖堯安蓉液相色譜應(yīng)用技術(shù)支持，生命科學(xué)和化學(xué)分析事業(yè)部安捷倫科技（中國）有限公司北京摘要在這篇應(yīng)用報(bào)告中，我們開發(fā)了一個(gè)用于測定食品基質(zhì)如谷物，芝麻醬等中黃曲霉毒素的方法，并對檢出限(LOD)，定量限(LOQ)，重現(xiàn)性，回收率等方面進(jìn)行了方法學(xué)考察。分析谷物，堅(jiān)果等食品基質(zhì)中黃曲霉毒素是保證食品安全的重要工作。在這篇報(bào)告中，我們介紹了一種同時(shí)測定四種主要黃曲霉毒素的柱后光化學(xué)衍生液相色譜熒光檢測方法：樣品經(jīng)過免疫親和小柱凈化，采用柱后光化學(xué)衍生方法和熒光檢測進(jìn)行測定，這種方法

2、可以滿足各個(gè)主要法規(guī)對于定量限的要求，并且比起常用的柱后電化學(xué)衍生方法更加容易操作。簡介?Agilent1260Infinity柱溫箱(G1316A)黃曲霉毒素是一種由真菌產(chǎn)生的有毒的致癌物質(zhì)。這種真菌在合?Agilent1260Infinity熒光檢測器(G1312B)，配置標(biāo)準(zhǔn)檢測池適的溫度濕度條件下會(huì)在土壤，谷物，堅(jiān)果或腐爛的植物中生長。(8μL)自然界中自然產(chǎn)生的黃曲霉毒素至少有14種之多，其中毒性最大?柱后光化學(xué)衍生裝置購買于中科匯仁科技公司，北京（PHRED-的是黃曲霉毒素B1。因此，很多國家和法規(guī)機(jī)構(gòu)都對食物中黃曲HR光化學(xué)衍生器）柱后衍生裝置串聯(lián)于色譜柱出口與熒光

3、檢霉毒素B1的含量做了嚴(yán)格規(guī)定，通常，對毒性比B1略小的其他測器入口之間。三種黃曲霉毒素B2，G1和G2的含量也會(huì)做出相應(yīng)規(guī)定。例如歐色譜柱盟規(guī)定黃曲霉毒素B1的在食物如谷物，堅(jiān)果中的含量最大允許范圍在2.0到8.0μg/kg(ppb)之間，上述四種黃曲霉毒素總含量允AgilentPoroshell120EC-C18,3.0x50mm,2.7μm(p/n699975-302)許值范圍在4.0到15.0μg/kg(ppb)之間[1,2]。美國FDA規(guī)定食品免疫親和小柱(RIDA?Aflatoxincolumn)購買于德國Biopharm含量限定值為20μg/kg，飼料含量限值為30

4、0μg/kg[3]。中國國標(biāo)公司GBT18979-2003規(guī)定四種黃曲霉毒素總量檢出限應(yīng)為1μg/kg[4]。軟件黃曲霉毒素測定通常使用液相色譜-熒光檢測的方法完成。但是由OpenLABCDSChemStationEditionforLC&LCMSSystems,于有些黃曲霉毒素在含水流動(dòng)相中會(huì)發(fā)生熒光淬滅，所以需要采Rev.C.01.03[37]取一定的衍生技術(shù)將它們衍生為不會(huì)淬滅的型態(tài)[5]。目前應(yīng)用比溶劑和試劑較普遍的衍生方法是在溴的作用下進(jìn)行柱后電化學(xué)衍生[6,7]。這種溶劑方法有很好的靈敏度，但是也有很多缺點(diǎn)，比如需要使用到對儀甲醇(HPLC級(jí))購買于迪馬公司.超純水由

5、美國Millipore公司器有強(qiáng)烈腐蝕作用的含溴流動(dòng)相，并且衍生裝置需要定期維護(hù)。MilliQ超純水制備系統(tǒng)制備另一種衍生方法是使用紫外光使黃曲霉毒素與水進(jìn)行衍生反應(yīng)，由標(biāo)準(zhǔn)品于水是反相色譜中的常用溶劑，所以這種方法操作十分簡便，并黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品(99%+B1:1.055μg/mL,B2:0.327μg/mL,且在靈敏度上與電化學(xué)衍生方法也有較好的可比性[8]。G1:1.082μg/mLandG2:0.309μg/mL溶解于甲苯/乙腈(98:2))購買于Supelco公司在這篇應(yīng)用報(bào)告中，我們在安捷倫1260Infinity四元泵液相色譜系統(tǒng)上開發(fā)了一個(gè)靈敏快速的用于分析黃曲霉

6、毒素B1，B2，G1和樣品玉米粉樣品購買于本地超市。加標(biāo)玉米粉樣品為在樣品前處理前G2檢測的柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測方法，這個(gè)方法在定量限和檢出限上的表現(xiàn)完全可以滿足各個(gè)主要法規(guī)的要求。向上述玉米粉樣品中加入相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線級(jí)別4的標(biāo)準(zhǔn)品（濃度數(shù)值見表1）。標(biāo)準(zhǔn)添加玉米粉樣品（含有9.00ppbB1和0.6ppbB2）購買于Trilogy公司。芝麻醬樣品（含有4.57ppbB1，其他三實(shí)驗(yàn)種濃度未知）來自于客戶。酸棗仁樣品（2010版中國藥典規(guī)定進(jìn)行儀器黃曲霉毒素檢測）購買于本地藥店。安捷倫1260Infinity液相色譜系統(tǒng):樣品和標(biāo)準(zhǔn)品制備?Agilent1260Infinit

7、y四元泵(G1311B)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：取10μL標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于10mL瓶中，室溫下氮?dú)?Agilent1260Infinity標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G1329B)吹干，用甲醇-水溶液(50:50,v:v)復(fù)溶，之后稀釋成如下濃度作為標(biāo)準(zhǔn)曲線不同濃度點(diǎn)：2表1.濃度級(jí)別濃度級(jí)別123456B10.10550.26380.52751.0555.27510.55B20.03270.08180.16350.3271.6353.27G10.10820.27050.5411.0825.4110.8