藏紅花懸浮培養(yǎng)產(chǎn)物的分離提取、分析及抗氧化活性研究

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1、ExtractionofSaffronsuspensioncultivatemetabolites，analysisandantloxidantactivityl●-●■'●Dissertal：ionSubmittedtoNanjingUniversityofTechnologyinpartialfulfillmentofrequirementforthedegreeofMasterofMedicineBvPinmeiⅥUSupervisors：Prof．LihongYUANApril2012碩士學(xué)位論文摘要現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：藏紅花提取物及

2、其提純組分藏紅花素、藏紅花苦素、藏紅花酸等在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)以及抗抑郁方面都具有良好功效，尤其是在抗腫瘤方面功效顯著，并且毒副作用低于現(xiàn)常用抗腫瘤藥物。人工栽培藏紅花主要以球莖繁殖，但球莖繁殖系數(shù)低，退化現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致藏紅花種源嚴(yán)重缺乏。藏紅花的有效成分主要集中于柱頭，由于藏紅花資源有限，柱頭產(chǎn)量極低。近年來，植物細(xì)胞工程的發(fā)展已為很多植物及其代謝產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)提供了機(jī)會(huì)，同時(shí)也為解決藏紅花資源短缺問題提供了一條有效途徑。本研究以藏紅花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)色素為實(shí)驗(yàn)材料，初步探索其化學(xué)成分及抗氧化活性，并且采用大孔樹脂吸附分離藏紅花細(xì)胞培養(yǎng)液中藏

3、紅花素及藏紅花苦素。研究結(jié)果如下：1．考察不同的展開體系對(duì)藏紅花色素類物質(zhì)分離效果的影響，當(dāng)丁醇：乙酸：水=4：1：1作為展開劑時(shí)，薄層色譜法分析藏紅花色素類物質(zhì)能達(dá)到較好的分離效果。對(duì)藏紅花柱頭醇提色素及藏紅花色素類物質(zhì)進(jìn)行薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)分析，藏紅花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞能夠產(chǎn)生與柱頭相同或相似的成分。藏紅花球莖愈傷組織懸浮培養(yǎng)產(chǎn)生藏紅花色素類物質(zhì)與幼芽愈傷組織懸浮培養(yǎng)產(chǎn)生藏紅花色素類物質(zhì)成分相似。添加銅離子、茉莉酸甲酯、殼聚糖、殼聚糖寡糖作為誘導(dǎo)子，樣品出峰的數(shù)量及保留時(shí)間基本一致，添加誘導(dǎo)子對(duì)代謝產(chǎn)物的組成影響較

4、少，但是對(duì)某些特征峰的含量及相對(duì)含量有明顯改變。2．采用HO·、DPPH·、ABTS+．清除法研究藏紅花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生色素的抗氧化活性，隨著加入樣品質(zhì)量濃度的增大，自由基的清除能力也依次增加。球莖產(chǎn)生藏紅花色素類清除HO·的IC50值約為柱頭醇提色素的30．2倍、抗壞血酸的54．7倍，幼芽產(chǎn)生藏紅花色素類物質(zhì)清除HO·的IC50約為柱頭醇提色素的5．4倍、抗壞血酸的9．8倍。球莖產(chǎn)生的藏紅花色素清除DPPH·的IC50值約為柱頭醇提色素的165倍、抗壞血酸的3．3倍，幼芽產(chǎn)生的藏紅花色素清除DPPH·的ICso約為柱頭醇提色素的74倍。球莖

5、產(chǎn)生的藏紅花色素清除ABTS+．的IC50值約為柱頭醇提色素的11．7倍、抗壞血酸的9．7倍，幼芽產(chǎn)生的藏紅花色素清除ABTS+·摘要的IC50約為柱頭醇提色素的6．6倍、抗壞血酸的5．5倍。說明離體培養(yǎng)產(chǎn)生藏紅花色素類物質(zhì)具有較高的抗氧化能力，可作為天然抗氧化劑進(jìn)行開發(fā)利用。3?？疾霩PD．100A大孔樹脂提取藏紅花素和藏紅花苦素的最佳工藝條件，其最適工藝條件為：25℃、色素液pH6、藏紅花素和藏紅花苦素上樣質(zhì)量濃度分別為1．0mg／mL和24．6mg／mL、溶液處理量1．5BV、吸附流速1．5mL／min、洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)40％乙醇溶液、

6、洗脫劑體積1．75BV、洗脫流速1．0mL／min的條件下分離藏紅花素和藏紅花苦素，藏紅花素和藏紅花苦素的吸附率分別達(dá)到94．4％和75．5％，解吸率分別為99．9％和87．5％。采用大孔吸附樹脂分離藏紅花培養(yǎng)液中藏紅花素和藏紅花苦素具有廣闊的工業(yè)前景。關(guān)鍵詞：藏紅花細(xì)胞懸浮培養(yǎng)成分分析抗氧化分離IIABSRTACTModemmedicinefindsthat：saffronextractanditsconstituents，suchascrocin．picrocrocinandcrocetinhasdistinctefficacyinant

7、i-tumor，immunoregulation，anti．depressionandSOon．Especially，saffronischaracterizedwithwidelyantitumorandcancerpreventiveactivities，andlittletoxicityandsideeffect．Undertheconditionsoftraditionalcultivation．saffronwaspropagatedbyvegetativeproductionthroughtheformationofadaught

8、erCOrm．However，thepropagationrateofsaffronWasrelativelylowandthedegradationofcorms