不同耐鹽棉花品種細(xì)胞結(jié)構(gòu)、mRNA差異表達(dá)及其BADH基因的序列分析

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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文不同耐鹽棉花品種細(xì)胞結(jié)構(gòu)、mRNA差異表達(dá)及其BADH基因的序列分析姓名：李玉全申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：沈法富2003.6.16y關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明‘南毛≥S萼本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間繪予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中疆確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解函東農(nóng)韭大學(xué)有關(guān)傈窩釉使焉學(xué)德論文的規(guī)定，同激學(xué)校保留和按要求向閣家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙蒺本和電予版，兔誨論文被

2、湊閡積借闋。本人授權(quán)滋東農(nóng)盈大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其健復(fù)制手段保存論文粕匯編本學(xué)位論文。，保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：考童、室導(dǎo)廖簽名：：移砍：黿日期：a鯽；，∥．，#出東農(nóng)鼗太學(xué)硬士學(xué)垃論文摘要本實(shí)驗(yàn)以耐鹽性不同的棉花鼎種(系)為材料，利用顯微制片技術(shù)和逛溶按零，分爨不爨濃度鹽耱追條磐下，藜簸幫薤敏感攘筏藩秘(系)豹葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)和核背酸降解情況的差異；利用DD—PCR技術(shù)，分析鹽脅遍條件下耐鹽和鹽敏感品種(系)mRNA的差異表達(dá)；將PCR技術(shù)

3、和DNA序列分孝廳技術(shù)相結(jié)合，探討耐鹽性不同的棉花品釉(系)BADH基豳序列及其所編碼蕊氯基酸序殘瓣差異。國E褥魏下結(jié)栗：1．通過鹽脅迫條件下的細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察，發(fā)現(xiàn)并找到了不同品種(系)對鹽脅迫的反應(yīng)關(guān)系。不管是耐鹽品種枝棉3號，還是鹽敏感品種魯棉6號，它鍵在羝濃度(O．1％NaCl)楚黲遭下璃求表現(xiàn)出細(xì)濺結(jié)穩(wěn)異常。醚鹽濃波豹增高，耐簸性不同的菇種(系)表現(xiàn)不閹。中濃度(0．2％NaCl)和高濃度(0．5％NaCI)鹽脅迫時(shí)，韌皮部受損早于木質(zhì)部，高耐鹽性品種枝桶3號與鹽敏感品種魯棉6號相比，韌皮部和本質(zhì)部受損害的程度

4、低；勢萎涎者魏耘疫部秘本蒺部受摸鬻豹程度都穗簸駱遙濃麥豹壤齋羹囂熱羹。2．鹽脅迫12h和24h時(shí)的棉葉總DNA電泳分析表明，NaCI鹽脅迫S}起了棉花的細(xì)胞程序性死亡。利用總DNA降解程度表現(xiàn)的細(xì)胞程序死亡表明：較低濃疫

5、號和9101l的mRNA，反轉(zhuǎn)漿為cDNA后進(jìn)行羞髀照示分析。實(shí)驗(yàn)利用引物60個(gè)，共擴(kuò)增出432條帶，其中OPD05和OPFII兩個(gè)引物寒?dāng)U增出侄侮片斷，占慫萼

6、物茲3％；竅52個(gè)弓

7、物擴(kuò)增續(xù)聚表現(xiàn)一致，蠢憨弓l物秘87％；勇終6令弓l物共擴(kuò)耩滋9條差霧贅，占總gI物的10％，由于這些差舜片段是在鹽脅迫下特異表達(dá)的，因此它們可能與耐鹽性稠必，但仍需進(jìn)～步證明。4．及DNA痔列數(shù)據(jù)瘴孛羧索舞擅魏BADH蕊囂靛菝蓉黢凄藏農(nóng)萁編弼的氨熬黻序列，利用分予生物學(xué)軟件DNAsis和blast等比較序列間的同源性，找出其保守J葶列

8、，然后根據(jù)保守序列分別設(shè)計(jì)3’和5’端引物，在不同耐鹽棉花品種細(xì)胞結(jié)構(gòu)、mRNA差異表達(dá)及其BADH基因的序列分析供試材料中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，找到了特異片斷。但不同材料間擴(kuò)增結(jié)果存在差異，其中魯棉研15僅擴(kuò)增出一條特異片斷，9101l和91015擴(kuò)增出三條特異片段，枝棉3號和魯棉6號擴(kuò)增出兩條特異片段。取枝棉3號和魯棉6號的介于1000bp～2000bp的特異片斷進(jìn)行序列測定并分析，結(jié)果表明，兩者之間同源性高達(dá)97％，因而它們?yōu)橥换蚱?，該序列共包?個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子，編碼55個(gè)氨基酸。Blast分析表明：特異

9、片斷與其他植物的BADH基因存在較高的同源性，且外顯子部分高度保守，同時(shí)也存在發(fā)生變異的活躍區(qū)域；由核苷酸序列推斷出其可能編碼的氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)其也與其他植物的BADH序列有較高的同源性。因此，我們擴(kuò)增出的特異片斷確為棉花的BADH基因片段，但是存在BADH基因的材料／并不一定表現(xiàn)高耐鹽性，因此認(rèn)為BADH基因并非棉花的耐鹽主效基因：f關(guān)鍵詞：棉花鹽脅迫PCDmRNA差異顯示BADHTheanalysisofcellarchitecture，mRNAdifferentialdisplayandBADHsequence

10、sofdifferentsalt-tolerantvarietiesincottonLiYuquan，(CollegeofAgronomy，ShandongAgriculturalUmversiV，Taian，Shandong，271018)ABSTRACTFordifferentsalt-tolerantvarwties--ZHM3，UⅥ6，