小檗堿抑制人胃癌BGC823細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

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1、蘭州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文小檗堿抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李國英申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：楊林西2003.5.1蘭型墮蘭墮絲：!：蘭垡堡苧。．—————————————————————————————————————————————一——。小檗堿抑制人胃癌BGC一823細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：研究小檗堿抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，以及其作用濃度、時(shí)間與抑制率、凋亡程度的關(guān)系。方法：應(yīng)用MTT法、集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀及免疫組織化學(xué)法觀察小檗堿抑制

2、BGC．823細(xì)胞增殖的作用。應(yīng)用HE染色、熒光染色，透射電鏡、TUNEL、流式細(xì)胞儀、瓊脂糖凝膠電泳及免疫組織化學(xué)法觀察小檗堿誘導(dǎo)BGC．823細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果：(1)10—60mg／L小檗堿對BGC．823細(xì)胞增殖有抑制作用，抑制作用隨時(shí)間的延長和濃度的增加而增強(qiáng)，呈時(shí)間一劑量依賴性，與對照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．01)。(2)20～60mg／L小檗堿可誘導(dǎo)BGC．823細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)作用隨時(shí)間的延長和濃度的增加而增強(qiáng)，呈時(shí)間一劑量依賴性，與對照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．01)。光鏡、熒光顯微鏡、透射電鏡及TUNEL觀

3、察細(xì)胞表現(xiàn)出較為典型的細(xì)胞凋亡的形態(tài)：細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)凝集．蘭型墜蘭墮型!!：堂竺絲苧——斷裂，顆粒含量增加；流式細(xì)胞儀出現(xiàn)典型的亞二倍體峰；瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)凋亡特有的梯形條帶。(3)免疫組織化學(xué)法檢測顯示小檗堿抑制突變型p53、p21和bcl．2蛋白的表達(dá)，促進(jìn)caspase-3蛋白的表達(dá)。結(jié)論：小檗堿體外能抑制人胃癌BGC一823細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，作用呈時(shí)間一劑量依賴性。抑制增殖作用機(jī)理可能為抑制突變型p53、p21蛋白表達(dá)，阻滯細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期。誘導(dǎo)凋亡作用機(jī)理可能為抑制bcl．2蛋白表達(dá)和促進(jìn)caspase．3蛋白表達(dá)，

4、從而誘導(dǎo)BGC．823細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞：小檗堿，人胃癌細(xì)胞BGC．823，細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡蘭叢墮蘭墮堡：!堂竺堡苧．——STUDYONBERBERINEINHIBITINGPROLIFERATIONANDINDUCINGAPOPTOSISOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLBGC-823ABSTRACTPurpose：Tostudytheeffectofberberineininhibitionofproliferationandinductionofapoptosisofhumangastriccarci

5、nomacellBGC-823．Methods：TheeffectofberberineininhibitionofproliferationwasmeasuredbyMTTassay,cloneformationandflowcytometry．TheapoptosisofBGC-823cellinducedbyberberineWasdetectedbyHEstaining，fluorescencestaining，electronmicroscope，TUNEL，agarosegelelectrophoresisandflowcy

6、tometry，respectively．Thelevelsofp53，p21，bcl-2andcaspase·3proteinweredeterminedbyimmunohistochemistry．Results：(1)lO娟0mg／LberberineCallinhibittheproliferationofhumangastriccarcinomaBGC·823cellinatime—anddose-dependentman／ler(p<0．01，comparedwithcontrolgroup)．(2)20～60mg／Lber

7、bednecaninducetheapoptosisofhumangastriccarcinomaBGC一823cellinatime—anddose·dependentmanner(p<0．01，comparedwithcontrolgroup)．Afterexposuretoberberine，theBGC一823蘭塑墮蘭墮熊!堂簋笙蘭一—————————————m———————————————————_———__—-————w——————————一一cellDresentedsomemorphologicfeaturesofapo

8、ptosisincludingcellshrinkage，nuclearcondensation，DNAfragmentationandapoptoticbodiesformation．Sometypica