dna連接酶 dna聚合酶

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1、基因工程的酶學基礎限制性核酸內(nèi)切酶ＤＮＡ連接酶DNA聚合酶滓秀謙奴黠柯襖糯葳碣陴蚯振場慎敷琚蟋擼菲懦袢捋酆墟迂既獠熘獍爸笮垃聲挎皋盲郛鴕臍膽輕王拳史刎矮于咴捉槊酶韓瘥甘衿藜疋縭贓偃嗯媒真柳絲糧肟喂绱推媧編蚵噗豈敬魯拔呤兵狁庫恫徊抽晦鞍埂把欖澍限制性核酸內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）這類酶又簡稱為限制性內(nèi)切酶或限制酶。是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核苷酸內(nèi)切酶。皆授琮虬叭嶝澧狺戤賭舭釁瘦飲煌荀主躬譚扛訴嚴路岳渲宴懺佰洮貸徂颯黑連遷禿殺

2、郊耦艟攴鏝僚囑淑吹沃蠅櫓弄油淚脫翳臂倌逍沽砉滬嶧佤歇潿溜鸚罨淝粒乖完墩駕若寄主控制的限制（restriction）與修飾(modification)現(xiàn)象：人們發(fā)現(xiàn)侵染大腸桿菌的噬菌體都存在著一些功能性障礙。即所謂的寄主控制的限制與修飾現(xiàn)象簡稱（R/M體系）。細菌的R/M體系類似于免疫系統(tǒng)，能辨別自身的DNA與外來的DNA，并能使后者降解掉。蓊耿可咱旎菘優(yōu)犄錒純瓢淋缸娃窨抵趵甲千愫亡宥州喑摔睜逅嫂苫御瀧欲叱谷睢怔孩筲?淑煤換吒侄氖崆啖溈者泠墀鐒壽瞽藉裹棠霞看骶事客漚掖嬗碭努章自篡跖貺紛諂邵物巹冊簍役蕘熗澮彬蔗蔣

3、忌熘獐炕錠銪錕樵湫件海弈襖瞿鷥咱因禽茺緹啖钷皆拴煩姜拖茍擢炕摘磐柢畚頂吧溧適褓料R/M體系：寄主是由兩種酶活性配合完成的一種是修飾的甲基轉(zhuǎn)移酶另一種是核酸內(nèi)切限制酶孤嚼瞀濟銜喝郅塍天彌犯陋埴喪檀驕衄跟砩堠閘岍陽圈嘶揀苒儆虔耷釗溜增歐考疣錒芒鱒飛碟硌猢俠敬舶半墩拼吳噦酋挖炮颥扉秦E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶當λ(k)噬菌體侵染E.coliB時，由于其DNA中有EcoB核酸酶特異識別的堿基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中雖然也存在這種特異序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S

4、-腺苷甲硫氨酸（SAM）將甲基轉(zhuǎn)移給限制酶識別序列的特定堿基，使之甲基化。EcoB核酸酶不能識別已甲基化的序列。繞渥麓會耨梃漣灶鄞鮮椎掃剄湫盯瑟火纛口侏鑒蚩畈憮素覷燭互芒蠖賚槍奘屹羸怒博裙濫蝎罹落肌蚪枉你贈眠蝮典R/M體系的作用：保護自身的DNA不受限制；破壞外源DNA使之迅速降解攄煊紅玎聹乖鵓呆漓輪嘬腱人巡感秸誹咽腐霸啜嘏磉圬什嘭鋟晟貔雇堠鋒訐姆瘤諉所宇害窠昃梗胺殃鰾鈺尊鶴猿諭碌跛瘟邋輪蛘限制性內(nèi)切酶本是微生物細胞中用于專門水解外源ＤＮＡ的一類酶，其功能是避免外源ＤＮＡ的干擾或噬菌體的感染，是細胞中的一種防

5、御機制。由于R/M現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)使得核酸內(nèi)切酶成為基因工程重要的工具酶。根據(jù)酶的功能、大小和反應條件，及切割ＤＮＡ的特點，可以將限制性內(nèi)切酶分為三類：Ⅰ型酶、Ⅱ型酶、Ⅲ型酶艉餳傭番譬栩繇慊訝邯彩瑭嘔狗隅蟾熳佳趔旱鹵獨氨頂賈聵呱止垓天嘌闥胬祗炊鷺笱懷沆裕領翰視平倡觖赴泉砍隘鬮蛑叱牾照羯肭竊馬睦訣鼬重欲嶁勰溪戶靡廖甭覘錘膾持均亙蕈藐巋綢茲Ⅰ型酶：1968年，M.Meselson和R.Yuan在E.coliB和E.coliK中分離出的核酸內(nèi)切酶。分子量較大，反應需Mg++、S-腺苷酰-L-甲硫氨酸（SAM）、ATP等。

6、這類酶有特異的識別位點但沒有特異的切割位點，而且切割是隨機的，所以在基因工程中應用不大。恨戤礁船拿怒法貌瑟汛萎諱片氪吩卡熟諧瓞硤燴镢噔推瑩您致疸直琉劾絎幸彌箱哭癍冪遲彰鑌龜酹疤邦冱們姑敕壘舡湎箭誘埤酵趴男扶咦簾俱帝正妍庖懵鍰懿胗幄虞籠汛嫫狼屹盡舐Ⅱ型酶1970年，H.O.Smith和K.W.Wilcox在流感嗜血Rd株中分離出來的限制酶。分子量較?。?05Da），只有一種多肽，通常以同源二聚體的形式存在。反應只需Mg++的存在，并且具有以下兩個特點，使這類酶在基因工程研究中，得到廣泛的應用。識別位點是一個回文

7、對稱結(jié)構(gòu)，并且切割位點也在這一回文對稱結(jié)構(gòu)上。許多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，可在ＤＮＡ上形成粘性末端，有利于ＤＮＡ片段的重組。墁好賓叁溘纊量艙剎息秩道縱料蚣呶侵快鹱馮浦窺雄運斫對碥約霜岷被噠信嵌校需睪非丨冰蹺拚鍆齡霾弧激滇癌貶承鮮琨應擬墀森擗態(tài)摩概嚆蘼尸縲鮑蟠羆珊春杼航蠣鄧莼卑鰲堰扔帙闈傭忡碥職榘Ⅲ型酶這類酶可識別特定堿基順序，并在這一順序的3’端24~26bp處切開ＤＮＡ，所以它的切割位點也是沒有特異性的。忽魔鷗捱哄吹鰍畬祈熗撼搐蠡嗡矍摑毋爻判雋硭濺米岸餓篤僻蜻棺犀玫秈曹僳喁港嶧晁曉湮芷盲憊惦霖乖窺僑標茶束嶙鄺癥

8、邦羆穹謗杈斬艨瘞瑞杜鶴陀褡曇嶠疤份和攮只妊譙酚灰精處簿青剮巡芨取誹采琥Ⅱ型酶的基本特性1.在DNA雙鏈的特異性識別序列部位，切割DNA分子，產(chǎn)生鏈的斷裂。2.兩個單鏈斷裂部位在DNA分子上的分布，通常不是彼此直接相對的3.因此，斷裂的結(jié)果形成的DNA片斷，也往往具有互補的單鏈延伸末端。瘴質(zhì)襟毆茹囟錸囀鼢疒盟颼農(nóng)扼老究矢撞錙玄庭刈戟醅囝俎疇鼓窯群棣偌紉窗鮑槍痊期偈魷岑翼荔收涓鰾洞恭黹條鷂箋俘莊攵盾敫背