單分散多色熒光微球的研究

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1、摘要分別采用液中干燥法和聚合法制各了熒光微球。以異硫氰酸熒光素為染料,聚苯乙烯為載體材料,F(xiàn)-68為水相乳化劑,采用改進的液中干燥法(o/w單乳法)制備微球,并對熒光微球的產(chǎn)率、粒徑和分散系數(shù)(c功以及熒光強度進行了考察與評價,研究了制備方法、油相和水相構(gòu)成、異硫氰酸熒光素(FI喲濃度等工藝參數(shù)的影響;使用數(shù)學模型分析了洗滌過程中的效率,結(jié)果表明每次使用30mL的洗滌液體時洗滌效率最高。.聚合法由單分散聚合和種子聚合兩步構(gòu)成:先以偶氮二異丁J睛(AIBN)為引發(fā)劑,乙醇為反應(yīng)介質(zhì),采用單分散聚合法制各了高度均勻的聚苯乙烯種子,種子粒徑為3.121am,分散系數(shù)(Cv)小于2%;后用超聲

2、將聚苯乙烯種子分散在十二烷基硫酸鈉(0.25wt%,SLS)的水溶液中,同時將鄰苯二甲酸二丁酯和三氯甲烷(共O.05薊加入SLS乳液,超聲乳化后加入到種子懸浮液中,在20℃下溶脹微球10h后,將溶解了引發(fā)劑過氧化苯甲酰(BPO)的苯乙烯單體(1wt%BPO,log)加入反應(yīng)器,并繼續(xù)在20℃下溶脹6ll后,升溫到60"C聚合10h,種子聚合得到的微球粒徑為9.9pro,分散系數(shù)(cv)小于4%;最后,將聚苯乙烯微球用氯仿的正丙醇溶液室溫避光溶脹24h,同時微球吸收熒光素(吖啶橙(AO)和羅丹明),將染色后的微球用乙醇洗滌三次以除去表面殘余熒光素;同時研究了聚合方法、聚合溫度、苯乙烯和聚

3、乙烯基吡咯烷酮(vveK.30)以及熒光素濃度等工藝參數(shù)的影響。使用動態(tài)平衡模型探討了單分散聚合的機理和聚合過程中初級粒子的形成過程。從原始的平行試驗數(shù)據(jù)中選出幾組最佳條件,采用基因遺傳算法優(yōu)化了溶脹過程中的反應(yīng)參數(shù),在第六代時得到一組最優(yōu)反應(yīng)條件,即10%(V,Ⅵ的三氯甲烷,30mmol的熒光素(含有33%的AO),溶脹時間為24h;熒光微球的表面形貌和未染色的聚苯乙烯微球間沒有明顯區(qū)別;傅立葉變換紅外光譜(gng)分析表明熒光素被吸收到微球內(nèi)部,而表面沒有檢測到明顯的殘余熒光素。制得的微球用490nm的光可激發(fā)出紅、綠、藍等多種顏色,其發(fā)射光譜范圍在510到500rim之間;產(chǎn)品大

4、小合適,熒光均勻,滿足了流式細胞分析對絕對計數(shù)熒光微球的要求。關(guān)鍵詞:熒光微球聚苯乙烯’單分散聚合動態(tài)平衡模型基因遺傳算法種子聚合ABSTRACTThefluorescentmicrospheresweresynthesizedbyDryingMethodinLiquidandPolymerizationMethod,respectively.Fluoresceinisothiocymmte(FrrOloadedmicrosphereswerepreparedbyimprovedDryingMethod證Liquid(oil·in-water,o/w)usingPolystyrene(

5、Ps)鵠carder,F-68鷦emulsifier.Thefluorescentmicrosphereswerecharacterizedforyield,particlesize,coe伍dentofvariation(Cv)andfluorescentintensity.Theinfluencefactors,includingpreparationmethod,oilandwaterphase,theconcenlrafionofFITC,werediscussed.Withamathematicmodel,theefficiencyofw鋤1lingprocessw懿anal

6、yzed.Thehigherefficiencyofwashingwasgamedwhenusing30mLliquidineverywashingprocess.ThePolymerizationMethoddividedintomonodispersepolymerizationandseedpolymerizationwereprepared鵲follows:Firstly,thehighlyuniformedpolystyrene(Ps)seedparticlesWel'eproducedbymonodispersionpolymerizationusinganinitiato

7、r,2,2-azobis-(isobutyronitrile)(AIBN)inalcoholmedia.The弘lIticlesizeofseeds砌3.12岬withtheCvlessthan2%.Secondly,Monodispersepolystyreneseedparticleswel"eredispersed試sodiumdodecylmlfate(o.25wt%,SLS)aqueoussolutionbysonication,sw

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