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1、自動生化分析技術第四章【案例導引】有一次,某生化室新來的工作人員在工作中發(fā)現(xiàn),自動生化分析儀顯示總膽紅素檢測試劑不足。于是,他從存放試劑的冰箱里取出總膽紅素試劑直接替下試劑盤內(nèi)原有的試劑,然后進行病人標本檢測,結(jié)果當天檢測結(jié)果普遍偏高。問題:1、為什么會出現(xiàn)結(jié)果偏高的現(xiàn)象?2、更換試劑應注意什么?第一節(jié)概述自動生化分析:集自動化技術、光學、微電子技術和計算機科學為一體,自動加樣、稀釋、混勻、反應、比色、分析過程的監(jiān)控、數(shù)據(jù)記錄、計算、打印、傳輸?shù)裙δ?。連續(xù)流動式生化分析儀離心式生化分析儀分立式生化分析儀干片式生化分析儀半自動生化分析儀全自動生化分析儀按結(jié)構(gòu)和原理的不同分類按自動化程度半自動生化
2、分析儀指在分析過程中的部分操作(如加樣、保溫、吸入比色、結(jié)果記錄等某一步驟)需手工完成,而另一部分操作則可由儀器自動完成。這類儀器的特點是體積小,結(jié)構(gòu)簡單,靈活性大,既可分開單獨使用,又可與其他儀器配套使用,價格便宜,一般在分立式分析儀中多常見。全自動生化分析儀從加樣至出結(jié)果的全過程完全由儀器自動完成。操作者只需把樣品放在分析儀的特定位置上,選用程序開動儀器即可等取檢驗報告。由于分析中沒有手工操作步驟,故主觀誤差很少,且由于該類儀器一般都具有自動報告異常情況,自動校正自身工作狀態(tài)的功能,因此系統(tǒng)誤差也較小。Aeroseti8000i2000i4000ci8200i2000srC8000樣品盤試
3、劑1試劑2攪拌器清洗裝置ISE(選配)樣品針光學系統(tǒng)—16個固定波長壓電攪拌—效果可靠8步清洗—確保了清洗效果ICTTM技術ISE模塊—檢測Na+、K+、Cl-165個反應杯位試劑—R1/65,R2/56加樣系統(tǒng)A.樣品準備:樣品管(杯)置于樣品架上,樣品架分圓盤狀和傳送條帶狀等類型B.樣品的吸?。河晌鼧俞樛瓿桑ǔQb有液面?zhèn)鞲醒b置,以防止空吸和吸入凝塊C.試劑分配:由試劑盤、試劑加樣器,攪拌裝置等部分組成檢測系統(tǒng)A.光源:目前大多數(shù)用鹵素燈,工作波長325—800nm。少數(shù)用氙燈,工作波長在285—750nm。B.分光裝置:采用干涉濾光片或光柵分光。干涉濾光片—價格便宜,但易受潮霉變光柵—前
4、分光和后分光C.比色杯:主要分為分立式和流動池式比色杯分立式比色杯—數(shù)量與檢測的速度有關流動池式比色杯—1個計算機系統(tǒng)A.病人樣品的識別B.添加樣本和試劑C.混合D.數(shù)據(jù)的處理,計算結(jié)果E.恒溫控制F.結(jié)果顯示和打印G.數(shù)據(jù)管理—存儲、質(zhì)控樣品盤標配試劑、標本雙條碼掃描功能第二節(jié)生化分析儀的參數(shù)設置與校準1.真值:是采用一種最可靠的參考方法測得近似真值的數(shù)值。2.定值:標定的質(zhì)控材料的已知值。3.靶值:排除離群值后所有觀察值的平均值。4.標準物:具有一種或多種足夠均勻的和很好確定的特性,用以校準測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。5.校準物/校準品:用于建立一個或多個定量值的物
5、質(zhì)。6.質(zhì)控物/質(zhì)控品:專門用于質(zhì)量控制目的的標本或溶液。一、名詞解釋:7.偏倚:被評價方法的測定值與決定性方法、參考方法、指定對比方法的測定值之間的差異。8.重復性條件:指在盡量相同的條件下,以及在盡量短的時間內(nèi)對同一被測對象相互獨立進行的測試條件。9.重復性標準:在重復性條件下所測試結(jié)果的標準差。10.再現(xiàn)性條件:在不同實驗室,由不同操作者使用不同的設備,按相同的測試方法,對同一被測對象相互獨立進行的測試條件。11.再現(xiàn)性標準:在再現(xiàn)性條件下所得測試結(jié)果的標準差。波長:范圍寬達340-804nm,16個波長任意選用340、380、404、412、444、476、500、524、548、57
6、2、604、628、660、700、748、804nm。溫度:37℃水浴恒溫系統(tǒng)加熱迅速,溫控均勻受環(huán)境溫度變化影響小水浴添加劑及流動活水循環(huán)防止細菌生長分析法:一點終點、兩點終點、兩點速率法、速率A法。二、生化分析儀的參數(shù)設置1、終點法被測物質(zhì)在反應過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物,到達反應終點,根據(jù)終點吸光度的大小求出被測物濃度,稱為終點法。該法稱為平衡法更為恰當。從時間-吸光度曲線來看,到達反應終點或平衡點時,吸光度將不再變化。終點法參數(shù)設置簡單,反應時間一般較長,精密度較好。分析方法分類終點時間的確定①根據(jù)時間-吸光度曲線來確定,②根據(jù)被測物反應終點,結(jié)合干擾物的反應情況來確定。(1)一點法(終
7、點法)在反應到達終點,即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值,用于計算結(jié)果。結(jié)果計算公式:待測物濃度CU=(待測吸光度AU-試劑空白吸光度AB)×KK為校準系數(shù)適合蛋白、糖、膽固醇測定圖4-3一點終點法反應曲線A單試劑一點終點法B雙試劑一點終點法(2)兩點法在反應過程中測定兩個時間點的吸光度,此兩點吸光度之差用于計算結(jié)果。計算公式為:CU=(待測吸光度A2-待測吸光度A1)×K