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《聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)鴨瘟病毒方法的建立及鴨瘟弱毒CHa株在雛鴨體內(nèi)分布規(guī)律的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)位論文聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是在I四Jil農(nóng)業(yè)大學(xué)完成的碩士學(xué)位論文，該論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，論文的的發(fā)表權(quán)和署名權(quán)屬于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)。本人完全清楚和意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。儲(chǔ)簽名勵(lì)舯鈿／日摘要本文根據(jù)基因庫(kù)(GeneBank)登載的鴨瘟病毒(DuckPlagueVirus，DPV＆DuckEnteritisVirus，DEV)基因組中的一個(gè)765bp長(zhǎng)的艮D(zhuǎn)RI片段(AnatidHerpesvirus1DNAPolymeraseGene＆UnknownGene)，運(yùn)用軟件OLIGO設(shè)計(jì)～對(duì)引物，其擴(kuò)增幅度為498bp。應(yīng)用這對(duì)引
2、物針對(duì)鴨瘟病毒(DPV)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得了與設(shè)計(jì)大小相符合的特異性條帶，成功建立了檢測(cè)鴨瘟病毒的PCR方法。確立了PCR的最佳反應(yīng)條件，引物濃度為0．5川d，Mg”作用濃度為2．5pM；最佳反應(yīng)模式為：95"(2變性5min，進(jìn)入94℃imin，51．8℃imin，72℃2min的循環(huán)，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后經(jīng)72℃延伸lOmin后于4℃結(jié)束反應(yīng)。特異性試驗(yàn)表明，對(duì)七種對(duì)照禽病病原體(雞馬立克氏病病毒、雞傳染性喉氣管炎病毒、鴨病毒性肝炎病毒、鴨巴氏桿菌、鴨大腸桿菌、鴨副傷寒沙門(mén)氏菌、鴨疫里默氏桿菌)的基因卻擴(kuò)增不出任何條帶，為陰性。敏感性試驗(yàn)表明，可檢測(cè)
3、到lOfg的鴨瘟病毒DNA模板。本文研究了鴨瘟病毒弱毒Cha株經(jīng)皮下、口服和滴鼻三種途徑接種含母源抗體的雛鴨后，應(yīng)用本文建立的PCR方法檢測(cè)不同時(shí)間鴨瘟弱毒在鴨體各組織器官的分布規(guī)律。分別在接種后的第4h、8h、12h、24h、3d、5d、7d、lOd、14d、17d和21d人工致死雛鴨，收集雛鴨的靜脈血液、心、肝、脾、肺、腎、十二指腸、直腸、法氏囊、胸腺、胰腺、延腦、大腦、小腦、舌頭、肌肉、骨髓、糞便和食道共19種樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明：①皮下組在接種后的第4h，即可在心、肝、脾、腎、法氏囊、胸腺、胰腺、延腦、大腦和小腦共lO種組織中檢出DPV的
4、DNA，8h后所有采取的組織器官均可檢測(cè)到DPV的DNA：②口服組最早在接種后4h可在舌頭和食道中檢測(cè)到DPV的DNA，8h后可在心、肝、脾、腎、胸腺、胰腺、延腦、大腦、小腦、舌頭、食道和血液共12組織器官中檢出DPV的DNA：③滴鼻組在接種后4h未能在組織中檢出DPV的DNA，8h后可在心、肝、脾、腎、胸腺、延腦、大腦、小腦、舌頭、食道和血液共11中組織中檢測(cè)到DPV的DNA。④在三種途徑中，檢出時(shí)間最早和檢出率最高的組織器官為肝臟、腦(大腦、小腦和延腦)，至第21天時(shí)均能穩(wěn)定、持續(xù)地從所采取的組織中檢測(cè)出DPV基因組。本研究建立的PCR方法適合于作為鴨瘟
5、病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷：應(yīng)用本研究建立的PCR診斷方法檢測(cè)鴨瘟病毒弱毒株在雛鴨體內(nèi)的分布規(guī)律，從而為臨床上更好地應(yīng)用鴨瘟病毒弱毒株預(yù)防鴨瘟提供了有力的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：聚合酶鏈反應(yīng)診斷方法鴨瘟弱毒株分布規(guī)律前言鴨瘟(DuckPlague，OP)，又名鴨病毒性腸炎(DuckViralEnteritis，DVE)，是鴨、鵝和天鵝的一種急性敗血性傳染病，其特征為體溫升高，兩腿麻痹、下痢、流淚和部分病鴨頭頸腫大。該病為一種廣泛嗜全身性感染的傳染病，臨床以急性敗血癥過(guò)程為特征。其特征是血管損傷，體腔出血，消化道出血、炎癥和壞死，淋巴器官受損以及實(shí)質(zhì)器官的退行性變化。發(fā)病
6、率和死亡率都甚高，是養(yǎng)鴨業(yè)的一大危害[卜?。1923年，BaudetLSJ報(bào)道荷蘭的家鴨暴發(fā)了一種急性出血性疾病。細(xì)菌培養(yǎng)陰性，家鴨接種無(wú)菌過(guò)濾的肝懸液后復(fù)制出該病。之后，在荷蘭又有更多的病例報(bào)道。DeZeeuw。。證實(shí)了Baudet的發(fā)現(xiàn)并再次指出病毒對(duì)鴨的專(zhuān)一性，但他認(rèn)為該病毒是適應(yīng)了鴨的雞瘟病毒。1942年，Bos?對(duì)前人的工作進(jìn)行了重新審查，并觀察了新暴發(fā)的疾病。對(duì)鴨的病變特征、臨診病程、免疫反應(yīng)進(jìn)行了深入的研究，他認(rèn)為該病不是由雞瘟病毒引起的，而是鴨的一種新的病毒性疾病，并提議稱(chēng)其為“鴨瘟(DP)”。1949年，Jansen和Kunst在第十四屆國(guó)
7、際獸醫(yī)學(xué)會(huì)上建議采用鴨瘟為法定名稱(chēng)。這主要是根據(jù)在自然和人工感染中該病原對(duì)鴨具有高度的特異性。在荷蘭，該病表現(xiàn)一直很一致，而潛伏期較長(zhǎng)。他將該病與新城疫區(qū)別開(kāi)來(lái)。隨后關(guān)于病毒增殖、發(fā)病率和分布，病理學(xué)和免疫力的深入研究也進(jìn)一步支持了這一觀點(diǎn)“。。隨后，本病相繼發(fā)現(xiàn)于法國(guó)(1949)、美國(guó)(1950)、印度(1963)、比利時(shí)(1964)、英國(guó)(1972)、泰國(guó)(1976)和加拿大(1976)，其流行范圍逐步擴(kuò)展開(kāi)來(lái)。1967年，美洲大陸報(bào)道了鴨瘟病毒在長(zhǎng)島的規(guī)?；本嗮B(yǎng)殖區(qū)暴發(fā)，此外在長(zhǎng)島的7個(gè)不同地方，野生、自由飛翔的水禽亦曾暴發(fā)鴨瘟”。。美國(guó)人根據(jù)本病
8、的病理變化特征，稱(chēng)之為鴨病毒性腸炎(DuckVira
