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《睪丸巨噬細胞對睪丸間質(zhì)細胞功能和形態(tài)影響的體外研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、中文撼要警丸豳隧細臆對睪丸聞旗纓艟功麓秘形態(tài)影瞧的體外研究攘要強豹：本實驗應(yīng)嬲纓憝漤葵、髓染色、綴緩純學染色、磁分離均稚酶聯(lián)免疫(磁酶兔)塞醺定慧測定法等技術(shù)方法，黟}究了經(jīng)囂多糖(1ipopolysaceharide，Lps≥激活成未激活酶睪丸蠶噬細胞(testicularmaerophage,TM)及羧藏題纜綱胞(peritonealmacrophage，PM)對睪丸聞饜綴施(Leydig細胞)的俸外作弼。主要躐察不同濃度酌匿噬細胞培養(yǎng)基(macrophag-eonditionedmedia。MCM)巍不同時間對Leydig纓施分泌的基礎(chǔ)搴酮的影噙，
2、以及對kyd遮細胞形態(tài)的影響，閼時對匱噬細胞分泌歐一糖細胞因子一婦緞憝分素一l(interleukin-1，融1)的律耀也進毒亍了分輯，以期遞一步了嬲肇丸在生瓔及病理狀態(tài)下TM與Leydig細胞糊囂{箬臻豹飆潮，探討黎丸壘精擻琢境維持期紊亂的影響睡索，必臨床診浚免疫性不薅提供參考。方法：實驗逡懲爨藤殘年雄牲Wistar大簸，髂蓬2009左右，分離褥到攀丸駐瞧纓腿、黢黢匝噬潮胞及Leydig綱藏，逑行以下辨究：1分烈劊餐LPS(501&g／m1)激活24h慧鬻丸戲羧麓豳滋綴臆條釋培莽基(毛怒一TMCM-24h、LPS-PMCM24h)、LPS激活48h酶肇
3、丸蠛腹腔醺噬綏箍條件臻莽基(LPS一喇eM一48h、LPS—PMCM-48h)；閼對制備來翮中文糖要LPS豹TM及PM培養(yǎng)土清，分別得到TMCM-24h、PMCM．24h、TMCM．48h和PMCM．48h四種條件培養(yǎng)基。2每組分不霹濃度<8％、5％、10％、20％、30％、40％和50％，即MCM占24孔培養(yǎng)板每孔液體總體積的百分文)分裂熱入Leydig綴艇培養(yǎng)基肉，勞設(shè)立只加LPS的空白組(觀察LPS對Leydig細胞有沒有點接作用)，24h蜃取土渚，鼴瑞±霉蘭諶l墼波分泌定量濺定鉸濺量Leydig細胞上清中的睪酮含量。確定阪噬細胞條件培養(yǎng)基酶最佳刺
4、激濃度。3按照以上得到的最餞濃度測定LPS-TMCM一24h在不麗糖闖離(1h、6h、l赫、24h、48h、72h，霹從加入LPS-TMCM-24h開始計時)對Leydig細胞上清犟酮含量的影響，確定最佳刺激對間；同時設(shè)立對照組(單獨培養(yǎng)Leydig細胞，不如LPS-TMCM-24h)。4入重綴lL—lp作為單獨的影響因索，加入kydig細胞魂，測量方法鄹上。5Leydig細胞分兩綴，一組單獨培養(yǎng)，一綴加入LPS-TMCM-24h，應(yīng)爨計數(shù)法測定培養(yǎng)24h、48h、72h、96h和120h的Leydig細胞的數(shù)量，比較兩組細胞增殖豹禱提。6Leydig細
5、胞中分別加入”S．TMCM．24h、臻S．P鹺CM-24h、騷蓮CM一烈h、麟CM-24h、乳l鞠設(shè)立對照組，培養(yǎng)24h后進行HE染色。7部分Leydig纓麓培莽子24魏叛孛懿玻璃蓋黃土，分兩組，一組作對照，一紐加入LPS．TMCM．24h，培游24h鑫進行飄酸脫氫酶(LD}壬)染色。續(xù)果經(jīng)計算機豳象分中文摘要析系統(tǒng)遴行纓艇陽性愛應(yīng)顆粒光密發(fā)(反映纓貔凌該酶的活性)測定。8所毒結(jié)果經(jīng)SPSSt0．0統(tǒng)詩分糈軟孝}逶行統(tǒng)計學處理。罐酮值和細胞計數(shù)值多組間比較皮崩方差分析，兩組闞細胞鬻性反應(yīng)顆粒斃密度院較應(yīng)耀t稔驗。結(jié)聚：1分離綱脆及純度鑒定1．1總的睪丸間
6、質(zhì)內(nèi)的細胞：經(jīng)過I型膠原酶及機械法的作用，大部分聞質(zhì)內(nèi)的細胞都已經(jīng)消純下來，而曲細糖管保持完整，表面光滑，基本沒有斷裂。1．2刑：培養(yǎng)30rain聰TM迅速貼璧，呈圓形或橢圓形，細胞周邊部可見小的突起，整個細胞中間稍厚，魎周較薄，呈油煎蛋樣。非特異性酯酶(NsE)染色鑒定陽性率達90％以上。1．3PM：培養(yǎng)30rain后PM迅速貼壁，形態(tài)多樣，有圓形、糖躐形、妖梭形等，可戇與其厥處的功縫狀態(tài)不固有關(guān)。NSE染色陽性率95％以上。1．4Leydig纓魏；培養(yǎng)24h纛，活蠛鑫抒黲Leydig綱麓大部分已貼壁，典型的呈多邊形、三角形，核大，胞質(zhì)鏊均勻黲纓鬏粒狀
7、，糕差曼微鏡下霹冤菇纓奪璃一的脂滴。3S羥膽圃醇脫氫酶(30。HSD)染色陽性率達80％以上。2最佳刺激濃度的確定2．1LPS—TMCM-24h使k剛埝細脆上清中辜醺含量增加，對Leydig細胞糕礎(chǔ)睪嗣合成具有促進作用，其中LPS—TMCM-24h濃度為20％時達到最大值(0．412±中文摘要0．052ng／m1)，與對照組(0．201_4-0．039ng／m1)比較P<0．01，即20％為最佳刺激濃度。2．2LPS．PMCM．24h、TMCM．48h使Leydig細胞上清中睪酮含量減少，對Leydig細胞基礎(chǔ)睪酮合成具有抑制作用。其中LPS—PMCM一
8、24h濃度為20％、30％、40％、50％時其睪酮含量分別為0．270±0．07
