大蔥再生體系建立及內(nèi)源激素變化的研究

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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大蔥再生體系建立及內(nèi)源激素變化的研究姓名：盛艷萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：楊建平;張松20040620關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行

2、檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名：魚(yú)墊渾導(dǎo)師簽名：繼畢日期：煎‘．2／山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文建立了以成熟胚為外植體的大蔥高效離體再生體系，并對(duì)其再生過(guò)程中內(nèi)源激素含量的變化進(jìn)行了分析，以期探討內(nèi)源激素的作用機(jī)制，并對(duì)大蔥組織培養(yǎng)中外源激素的合理添加提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：試驗(yàn)通過(guò)對(duì)大蔥不同器官：幼葉、根、花蕾和成熟胚進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，結(jié)果表明成熟胚為最佳外植體，誘導(dǎo)率高且穩(wěn)定；花蕾次之，關(guān)鍵是掌握幼蕾的時(shí)期；幼葉和根較難誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生。大蔥成熟胚在添加2,4．D

3、1．0-2．0mg．1以+6．BA2．0．4．0mg．1以的培養(yǎng)基上都可產(chǎn)生質(zhì)量較好的愈傷組織，其中最佳誘導(dǎo)愈傷組織的激素組合為2．．．10+6一．．1～。愈傷組織繼代培養(yǎng)初期以2，4．．,4D10mgBA20mgD10mg．14+6．BA2．0mg．10為好，2,4．D濃度過(guò)低或者代之以NAA都會(huì)導(dǎo)致愈傷組織過(guò)早的進(jìn)入分化階段，不利于增殖。繼代培養(yǎng)后期應(yīng)適時(shí)降低2,4．D濃度，以使愈傷組織能保持較好的分化性能。大蔥愈傷組織分化的激素組合以NAA0．5mg．1d+6．BAl．0mg．1d為最好，分化率達(dá)81．67％。6-BA濃度升高雖然可以提高分化率

4、，達(dá)83．33％，但是極易導(dǎo)致嚴(yán)重的玻璃化。大蔥愈傷組織分化產(chǎn)生不定芽后應(yīng)及時(shí)轉(zhuǎn)移到MSo培養(yǎng)基上，以逐步消除玻璃化現(xiàn)象，保證不定芽的正常生長(zhǎng)。馴化移栽大蔥再生苗的最佳基質(zhì)為未滅菌的蛭石與草碳的混和基質(zhì)(蛭石：草碳=1：1)，可能是其透氣性和保水性比較適合大蔥再生苗的生長(zhǎng)。大蔥成熟胚誘導(dǎo)30d的愈傷組織分別在2,4．D1,0mg．1‘1+6一BA2．0mg．1q和2．．．1d+6．．．1。1各繼代，然后轉(zhuǎn)移到．．1‘1,4DO5mgBA20mg30dNAA025mg+6．BAl．0mg．1。1培養(yǎng)基上或僅降低2,4．D濃度，可誘導(dǎo)胚狀體的產(chǎn)生，前者的

5、發(fā)生率明顯高予后者，說(shuō)明2，4．D對(duì)于大蔥胚狀體的產(chǎn)生有抑制效應(yīng)，而NAA則可能有促進(jìn)作用。大蔥的花蕾和愈傷組織都對(duì)抗生素Kan有很高的抗性，在Kan濃度高達(dá)200．0mg，l。1時(shí)也有一定的存活率，愈傷組織甚至還能蜘36．35％的增長(zhǎng)率緩慢生長(zhǎng)，這與許多其它單子葉植物類(lèi)似；相對(duì)而言，大蔥對(duì)抗生素G4l8則較為敏感，在G418濃度>130．0mg．1’1時(shí)就可被完全致死。因此，在以nptII作選擇標(biāo)記基因的大蔥轉(zhuǎn)基因工作中，G4ls較適合作篩選劑。大蔥再生體系建立及內(nèi)源激素變化的研究大蔥成熟胚再生過(guò)程中內(nèi)源激素含量的變化試驗(yàn)表明，生長(zhǎng)素對(duì)大蔥的離體再

6、生表現(xiàn)為階段效應(yīng)，在愈傷組織誘導(dǎo)的啟動(dòng)階段含量很高，有積極作用；在不定芽分化的啟動(dòng)階段含量降低，有負(fù)作用。脫落酸在愈傷組織誘導(dǎo)初期含量明顯下降，中后期含量也很低，可能有負(fù)調(diào)控作用。赤霉素在分化過(guò)程的含量明顯高于繼代培養(yǎng)過(guò)程，可能對(duì)大蔥愈傷組織的分化有促進(jìn)作用。細(xì)胞分裂素在不定芽分化后期，即玻璃化發(fā)生期，含量急劇上升；在玻璃化芽轉(zhuǎn)變?yōu)檎Ｑ康倪^(guò)程中顯著下降，因此推測(cè)可能是導(dǎo)致大蔥不定芽玻璃化的主要因素。關(guān)鍵詞：大蔥；成熟胚；愈傷組織誘導(dǎo)；分化；玻璃化；內(nèi)源激素4山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文StudiesonRegenerationSysteminVitro

7、andtheChangesofEndogenousHomaonesofWelshonion(Allium．fistulosumL．)AbstractAnefficientgenerationsysteminvitroofwelshonion口Ilium．fistulosum．L)wasestablishedinthisexperiment，usingthematureembryosasexplants，andtheendogenoushormoneschangesduringregenerationwasstudied．Thedifferentorg

8、ansofwelshonion--immatureleaves，roots，floralbudsandmat