NRP2在乳腺癌中的作用及與Wnt_β-catenin信號(hào)通路相關(guān)性研究

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1、學(xué)校代碼：１０２８５學(xué)號(hào)：２０１４４２２１０７８系Ｗ、魯＿ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ｜／－ｃａＮＲＰ２在乳腺癌中的作用及與Ｗｎｔｔｅｎｉｎ信號(hào)ｐ通路相關(guān)性研究ｒｃｈｏｎｈｅｒｏｒｅｒａｎｄｉｔｓｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＲｅｓｅａｔｌｅｏｆＮＲＰ２ｉｎｂａｓｔｃａｎｃｅｃ－Ｗｎｔ／ｃａｔｅｎｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｐｇｇｐｙ研究生姓名黃篩指導(dǎo)教師姓名郭玲玲免疫學(xué)專業(yè)名稱｜Ｌ研究方向月中瘤病理學(xué)所在院部醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院ＢＨ論文提交

2、日期２０１７年４月■NRP2在乳腺癌中的作用及與Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)性研究中文摘要NRP2在乳腺癌中的作用及與Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)性研究中文摘要【目的】分析NRP2在乳腺癌（BC）組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性，探討NRP2基因在BC惡性演進(jìn)過(guò)程中的生物學(xué)功能及其分子機(jī)制，為BC的臨床診斷與治療提供新的生物標(biāo)志物和分子靶點(diǎn)?！痉椒ā康谝徊糠郑?、運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)和IHC染色技術(shù)檢測(cè)NRP2在BC組織與癌旁組織中的差異性表達(dá)。2、統(tǒng)計(jì)分析BC組織中NRP2與BC臨床病理特征的相關(guān)性。第二部分：1、運(yùn)用qRT

3、-PCR技術(shù)和Westernblot技術(shù)檢測(cè)NRP2在五種不同BC細(xì)胞株中的差異性表達(dá)，篩選出表達(dá)水平最高的BC細(xì)胞株作為研究對(duì)象。2、構(gòu)建NRP2小分子干擾RNA（siRNA）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染BC細(xì)胞，運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)和Westernblot技術(shù)檢測(cè)其對(duì)NRP2表達(dá)的抑制率。3、MTT實(shí)驗(yàn)和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BC細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞增殖活性的改變。4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)BC細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞凋亡速率的改變。5、劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BC細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的改變。第三部分：1、運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)和West

4、ernblot技術(shù)檢測(cè)低表達(dá)NRP2的BC細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子β-catenin的表達(dá)變化。2、運(yùn)用IHC染色技術(shù)檢測(cè)β-catenin在BC組織與癌旁組織中的差異性表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析BC組織中NRP2與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性。3、運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)和Westernblot技術(shù)檢測(cè)低表達(dá)NRP2的BC細(xì)胞中β-catenin下游效應(yīng)分子CyclinD1、c-myc、MMP2、vimentin、E-Cadherin的表達(dá)變化。4、IHC染色檢測(cè)β-catenin下游各效應(yīng)分子在BC組織中的表達(dá)水平，統(tǒng)計(jì)分析NRP2與各效應(yīng)分子表

5、達(dá)之間的相關(guān)性。I中文摘要NRP2在乳腺癌中的作用及與Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)性研究【結(jié)果】第一部分：1、NRP2在BC組織與癌旁組織中的表達(dá)具有顯著差異，與癌旁組織相比，BC組織中NRP2的表達(dá)水平顯著增高。2、BC組織中高表達(dá)的NRP2與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)（p<0.05），而與患者年齡、腫瘤直徑、分級(jí)、ER、PR、HER-2的表達(dá)之間無(wú)明顯相關(guān)性（p>0.05）。第二部分：1、NRP2在五種BC細(xì)胞株中均有不同程度的表達(dá)，且在轉(zhuǎn)移潛能最高的MDA-MB-231細(xì)胞中表達(dá)最高。2、MDA-MB-231細(xì)胞中轉(zhuǎn)染NRP2siRNA后，NRP

6、2的表達(dá)顯著受到抑制。3、MDA-MB-231細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞增殖活性降低。4、MDA-MB-231細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞的凋亡速率無(wú)明顯改變。5、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MDA-MB-231細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞的遷移能力降低，劃痕愈合速度變慢。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MDA-MB-231細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后細(xì)胞的穿膜數(shù)量減少，細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力受到抑制。第三部分：1、MDA-MB-231細(xì)胞中抑制NRP2的表達(dá)后Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子β-catenin的表達(dá)也隨之降低。2、71.698%的BC組織呈

7、現(xiàn)β-catenin高表達(dá)，且BC組織中NRP2與β-catenin的表達(dá)具有相關(guān)性（p<0.05）。3、抑制NRP2的表達(dá)后β-catenin下游效應(yīng)分子c-myc、MMP2表達(dá)顯著降低，E-Cadherin表達(dá)顯著升高，CyclinD1表達(dá)降低但無(wú)顯著性差異，而vimentin表達(dá)無(wú)明顯變化。4、BC組織中c-myc、MMP2、E-Cadherin與NRP2的表達(dá)具有相關(guān)性（p<0.05）?！窘Y(jié)論】1、NRP2在BC組織中特異性高表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)。2、siRNA靶向干擾NRP2后BC細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力降低。3、BC組織中NRP2與