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《擬南芥IQM1互作蛋白的篩選與初步鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)學(xué)校代碼：11078UDC密級(jí)學(xué)號(hào)：2111514016廣州大學(xué)學(xué)位論文擬南芥IQM1互作蛋白的篩選與初步鑒定羅慧婷學(xué)科專業(yè)（領(lǐng)域）：遺傳學(xué)研究方向：植物重要基因功能的研究與利用論文答辯日期：2018-5-25指導(dǎo)教師（簽名）：答辯委員會(huì)主席（簽名）：答辯委員會(huì)委員（簽名）：SortCodeUniversityCode：11078UDCSecretGradeNumber：2111514016GuangzhouUniversityMasterDissertationScreeningandPreliminaryIdentificati
2、onofInteractingProteinswithIQM1inArabidopsisLuoHuitingSubjectMajor：GeneticsDirectionofStudy：FunctionalStudyandutilizationonImportantPlantGenesAnswerDate：Supervisor(Signature)：AnswerCommitteeChairman(Signature)：AnswerCommitteeCommitteeman(Signature)：廣州大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交
3、的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日廣州大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人授權(quán)廣州大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印﹑縮印或掃描等復(fù)制手段保存﹑匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位
4、論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)）學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日摘要摘要AtIQM1由At4g33050編碼。本課題組的前期研究表明，IQM1編碼一個(gè)Ca2+不依賴的鈣調(diào)素結(jié)合蛋白（calmodulin-bindingprotein,CaMBP），介導(dǎo)CaM、光和部分非生物脅迫信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與氣孔防衛(wèi)和根生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)。本文擬通過(guò)分析植物中IQM1的蛋白量、IQM1互作蛋白的酵母雙雜交篩選、雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證以及CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)構(gòu)建互作蛋白基因突變體等方法，進(jìn)一步研究IQM1在擬南芥中的分子機(jī)能，結(jié)果
5、如下：1.通過(guò)IQM1半定量RT-PCR分析，轉(zhuǎn)基因植株P(guān)35S:HA-IQM1的IQM1基因的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型Col，但在蛋白表達(dá)量分析中，P35S:HA-IQM1的WesternBlot顯影結(jié)果顯示為無(wú)條帶。2.構(gòu)建誘餌蛋白表達(dá)載體pGBKT7-IQM1，與擬南芥幼苗cDNA文庫(kù)AD質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母AH109株系，經(jīng)過(guò)初篩、復(fù)篩、測(cè)序得到了15個(gè)候選互作蛋白，構(gòu)建這15個(gè)基因的pGADT7載體，并分別與pGBKT7-IQM1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母AGB109株系，一對(duì)一進(jìn)行酵母雙雜交互作驗(yàn)證，初步確定編碼蛋白At5g51570、轉(zhuǎn)錄因子TC
6、P21及LSU1能與IQM1蛋白在酵母體內(nèi)互作。3.構(gòu)建TCP21和LSU1基因的雙分子熒光互補(bǔ)載體，制備野生型Col葉片的原生質(zhì)體，利用質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，并在激光共聚焦顯微鏡中觀察、拍照。結(jié)果顯示pSAT1-nEYFP-IQM1與pSAT1-cYFP-TCP21、pSAT1-cYFP-IQM1與pSAT1-nEYFP-TCP21、pSAT1-nEYFP-IQM1與pSAT1-cYFP-LSU13個(gè)組合以及pSAT1-cYFP-IQM1與pSAT1-nEYFP-LSU1組合在原生質(zhì)體中都能發(fā)出熒光。這說(shuō)明IQM1與TCP21以及LSU1
7、在植物細(xì)胞中存在相互作用。4.利用CRISPR/Cas9技術(shù)，構(gòu)建了IQM1互作蛋白與TCP21和LSU1的基因組編輯載體，為了后續(xù)研究IQM1與TCP21和LSU1的遺傳關(guān)系奠定了材料基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：IQM1；鈣調(diào)素；互作蛋白；擬南芥IAbstractAbstractAtIQM1isencodedbyAt4g33050.OurproviousresearchesshowedthatIQM1encodesanovelCa2+-independentcalmodulin-bindingprotein(CaMBP)whichmediatesth
8、esignaltransductionofCaM,light,andsomeabioticstresstoregulatestomatadefense,rootgrowthandrootdev
