云南煙草病毒檢測及防治研究

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1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文云南煙草病毒檢測及防治研究姓名:劉勇申請學(xué)位級別:博士專業(yè):植物病理學(xué)指導(dǎo)教師:周雪平20060901浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要煙草病毒病是危害煙葉生產(chǎn)最重要的病害之一,危害煙草的病毒種類多達30多種,花葉型病毒病田問常見,曲葉型病毒病的危害呈上升趨勢。為了弄清云南煙草病毒病的種類,對云南省煙草花葉型和曲葉型病毒病樣品進行了血清學(xué)和分子檢測,并對煙草病毒病控制進行了研究。采用抗原直接包被法和雙抗體夾心法對采自云南煙草花葉病樣本進行了病毒種類檢測,并利用三抗體夾心法對黃瓜花葉病毒(CucumbermosaicVirUS,C塒)的亞組類型進行了鑒定:在云南采集的5

2、20個病毒病樣本中,煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus,T^I\,)、ClI、,和馬鈴薯Y病毒(Potatovirus只PW)總檢出率分別為71.74%、55.01%和6.35%,云南、湖南和福建64個cM\『陽性樣品中,屬亞組I的樣品為57個,占89.1%,屬亞組II樣品為lO個,占15.6%。采用煙草曲莖病毒(TobaccocurlyshootVirUS,TbCSv)、云南煙草曲葉病毒(Tobacco]eafctLr]Yunnanvirus,TbLcYNV),中國番茄黃化曲葉病毒(Tomatoyellowleafcur]Chinavirus,TYLCCNV)

3、的特異引物,對云南煙草曲葉病樣本的病原進行了PCR檢測;采用粉虱傳雙生病毒PA和PB通用引物,對代表性樣品進行了擴增、克隆測序和序列比對。檢測表明云南煙草曲葉病是由TbCSV、TbLCYNV和TYLCCNV三種病毒引起的。109個煙草曲葉癥狀的樣本中,TbCSV總檢出率為41.3%、TbLCYNV總檢出率為16.5%、TYLCCNV總檢出率為53.2%。其中兩種或三種病毒復(fù)合侵染的檢出率為8.2%。500bp序列比較表明,這些病毒分離物之間的相似性為77%~100%。依據(jù)500bp序列構(gòu)建的同源關(guān)系樹上,所有TYLCCNV的分離物因地理隔離聚為兩大類,~類為保山分離物,相互間核

4、苷酸序列相似性為93%,另一類為文山和紅河分離物,相互間核苷酸序列相似性為95%,兩類之間核苷酸序列相似性為89%。對其中一個分離物Y264DNA-A的全序列測定表明,Y264DNA—A全長2741個核苷酸(nts)。具有典型的begomoviruses結(jié)構(gòu),共編碼6個開放讀碼框(0RFs)。DNA-A全長與中國番茄黃化曲葉病毒分離物YIO的相似性最高,為91.3%,各ORFs編碼的氨基酸序列與TYLCCNV的相似性最高。因此,Y264為TYLCCNV的一個分離物。采用三抗體夾心法對云南煙草漂浮苗樣本進行了病毒種類檢測,在云南采集的1400多個煙草漂浮苗樣本中,TMv的檢出率占

5、總陽性樣本數(shù)的95%以上;clIv和馬鈴薯Y屬病毒(包括PVY和TEv)的檢出率占總陽性樣本數(shù)的5%以下。在漂浮苗移栽后至團棵期,在發(fā)病率高(20%以上)的田塊中采集的480個花葉病樣本中,浙江大學(xué)博士學(xué)位論文不同田塊Tw檢出率48.1%~100%,而CMV和馬鈴薯Y屬病毒(包括PrY和TEV)檢出率0%~12.2%。表明危害云南煙草漂浮苗的主要病毒種類為TMv。采用半葉法測定了9種藥劑對煙草病葉汁液中TMV的鈍化效果,采用葉面噴霧法測定了藥劑對煙草的藥害濃度與藥害癥狀。室溫下一定濃度的藥劑與1:10000的TMV病葉汁液等體積混合3min時,30%有效氯漂白粉10倍液、98%

6、磷酸三鈉·12H。010倍液、7%有效氯次氯酸鈉150倍液、美國消毒劑125倍液和75%酒精TMV的抑制率可達100%;10%二氧化氯200倍液和40%育寶150倍液與TMv混合30min時對TMv的抑制率可達100%和96.30%;0.6%菌毒凈19.5倍液、3.95%病毒必克800液和24%毒消800倍液與TlIv混合30min時對TM、,的抑制率低于80%。除0.6%菌毒凈較安全外,供試消毒劑在常用濃度下接觸煙草葉片,產(chǎn)生較嚴重藥害,癥狀因消毒劑種類不同,主要為褪綠斑點、壞死斑點和畸形。試驗了在漂浮育苗池中使用消毒劑對Tw的鈍化效果和煙苗出苗和生長的影響??莅呒闹鳒y定表明

7、:與nfv病葉汁液2萬倍稀釋液接觸12hr,對TMV的抑制率高于80%的消毒劑及濃度為:30%有效氯漂白粉15mg/L和150mg/L;7%有效氯次氯酸鈉2以幾和20嶇/L;美國消毒劑5I_zl/L和50m幾。漂浮池水中加入低濃度消毒劑,出苗率和成苗率與對照差異不顯著,但對煙苗后期長勢的影響因消毒劑種類而有差異。對煙苗長勢有促進作用的消毒劑有:磷酸三鈉15mg/L~300mg/L、硫酸銅50mg/L~100mg/L、高錳酸鉀10mg/L~40mg/L和24%毒消10蛆/L。對煙苗長勢低濃度無

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