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《稻瘟病菌無毒基因AVRPii物理圖譜的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文稻瘟病菌無毒基因AVR-Pii物理圖譜的構(gòu)建姓名：肖進(jìn)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：彭友良20040601中文摘要由子囊菌MagnaporthegY2"SeH引起的稻瘟病是世界性的水稻病害之～，危害嚴(yán)重。防治該病的有效措施是栽培抗病品種，但更重要的方面是要廣泛分析我國現(xiàn)有水稻品種的抗瘟基因型、了解田間菌群中無毒基困的種類、數(shù)量和分布并及時監(jiān)測其變化。這將有助于了解病原菌小種的變異機(jī)理；有利于建立稻瘟病菌小種快速鑒定的分子技術(shù)，在實(shí)踐上用于指導(dǎo)抗瘸品種的合理布局
2、平II輪換，以更有效地控制瘸害的發(fā)生。本研究在張國珍博士獲得與無毒基因AVR-Pii連鎖的兩個RAPD標(biāo)記(并轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記1：OPl07100和OPMl0?J的基礎(chǔ)上進(jìn)行染色體步移，旨在克隆AVR．Pii無毒基因。首先，采塒PCR的方法對兩個SCAR標(biāo)記進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)在SCAR標(biāo)記OPMlol3i4處菌株P(guān)131與Y34存在差異；不過，在SCAR標(biāo)記OPl07Ⅲ處菌株P(guān)131與Y34不存在差異。用標(biāo)記OPMIOlⅢ的SCAR引物在菌株P(guān)13l與Y34中分別擴(kuò)增出了1314bp與16fulbp的
3、兩條不同長度的DNA片段，測序后發(fā)現(xiàn)后者是在1314bp中插入了一段350bp的重復(fù)序列?；蚪MSouthern雜交及數(shù)據(jù)庫BLAST表明：標(biāo)記OPl0770a在P131與Y34基因組是單拷貝的．SCAR標(biāo)記OPMIOlsl4的13
4、4bp中有重復(fù)序列。對兩個SCAR標(biāo)記和AVR-Pii基因在染色體上的定位分析表明它靠】位于稻瘟病菌基因組第1J號染色體的端粒附近位置。其中無毒基因AVR-Pii較兩個標(biāo)記更靠近端粒。同時它們都在supercontiglll上(supercontiglll上～共有15
5、4個contigs，從Conti92．513到Contii92．360)，其中Comi92，360是在端粒位置。SCAR標(biāo)記OPMlol314被定位在Conti92．387上，OPl07700被定位在Conti9238I上。通過兩個標(biāo)記相良進(jìn)行染色體步移，構(gòu)建了兩個SCAR標(biāo)記區(qū)域的物理圖譜，由3個禽有晟小重疊的TAC克隆覆蓋了兩個標(biāo)記區(qū)域，分析兩個標(biāo)記問的物理距離大約為90Kb，根據(jù)兩個標(biāo)記間的遺傳距離為3．16cM，可以推算出在該區(qū)域一個遺傳單位相當(dāng)于28Kb的物理距離。比Farman等發(fā)現(xiàn)的
6、一個遺傳單位相當(dāng)于50Kb的物理距離要小：比Zhu等發(fā)現(xiàn)的一個遺傳單位相當(dāng)于4iKb的物理距離也小，而與AFRI．C039區(qū)域～個cM對應(yīng)33．5Kb的物理距離耜近。推澳4可能是由于該區(qū)域在染色體端粒的位置，重組事件發(fā)生的多的緣故。同時也可以知道近的SCAR標(biāo)記OPl07700到目的基因的距離約是186Kb。在此基礎(chǔ)上向目的基因進(jìn)行染色體步移，用4個含商最小重疊的TAC克隆向目的基因前進(jìn)了約210Kb，由遺傳圖譜與物理圖譜的對應(yīng)關(guān)系知道已經(jīng)覆蓋了無毒基因AVR-Pii醫(yī)域。這些工作為無毒基因AFR
7、-Pii的克隆奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：稻瘟病菌Magnaporthegrisea；無毒基因；物理圖譜；遺傳圖譜AbstractFirstly,thetwoSCARmarkersOPl077∞andOPMlol314wasanalyzed．theresultshowthatthestrainsofriceblastfungusP131andY34havediscrepancywheretheplaceoftheSCARmarkerOPMlOisl4．ThePeRamplificationproducts
8、are1314bpinP131andI664bpinY34．butnothingin70-15respectivlywiththeprimeroftheSCARmarkerOPMl01314,Then，the1664bpDNAbandwasclonedandsequenced，Theresultshowthatthesequenceof1664isinsertinga350bprepeatedsequenceintothesequenceof1314．Thereisnodiscrepancybet
9、weenthestrainsofriceblastfungusPI3I，Y34and70·15wheretheplaceoftheSCARmarkerOPl077130．GenomicSouthernBlotandBLASTusingthetwoSCARmarkersOPl07700andOPMl01314．showthatthemarkerOPl07700isasinglecopyinPl31andY34genome，andthemarkerPMl01314havesomerep
