大鼠胎肝前體細胞的生物學特性研究

大鼠胎肝前體細胞的生物學特性研究

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1、第四軍醫(yī)大學碩士學位論文大鼠胎肝前體細胞的生物學特性研究姓名:萬東君申請學位級別:碩士專業(yè):實驗動物學指導教師:李六金2003.5.1獨制性聲明秉承學校嚴謹?shù)膶W風與優(yōu)良的科學道囂,本^聲四所呈交的論文是藏個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究戚果。盡孤所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文tll不包含其他^已經(jīng)發(fā)表或撰寫_過的研究成果,不包含本人或伯人已申請學位或其他用途使用過的威果。與蕕一同工作的同志對本研究所做的任胃貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請學位論文與資科若育不實之處,本八承擔一坍棚關(guān)責任。論文作者簽名:丕至星1311t保護知識產(chǎn)權(quán)聲明

2、本^完全了解第四軍醫(yī)大學有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)帕規(guī)定,即:研究生在校攻讀學位期阿論文工作帕知識產(chǎn)權(quán)單位晨第四軍醫(yī)大學。本八保證畢業(yè)離枝后,發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位仍然為第四軍醫(yī)大學。學校有權(quán)保留送交論文的復Ell件,允許論文被杳鬩租借阿;學??梢怨颊撐牡娜炕蚬莾?nèi)容(保密內(nèi)容除外),可以采用影印、縮印或其他復嗣手段保存論文。論文作者簽名萬東晃導師簽番筮妻暨如-:堡竺二!第四軍醫(yī)大學碩士學位論文英文縮略詞對照表縮寫英文全稱中文全稱HPFLHepaticprogenitoroffetalliver胎肝前體細胞EDEmbryonicday胚齡M1’TTetrazoliu

3、mblue噻唑藍LIFLeukemiainhibitoryfactor白血病抑制因子LFFLiverfunctionfailure肝功能衰竭LDHLactatedehydrogenase乳酸脫氫酶PREFPrimaryratembryonicfibroblast原代大鼠胚胎成纖維細胞HGFHepaticgrowthfactor肝細胞生長因子G一6-PGlucose一6一phosphatase葡萄糖一6一磷酸酶FBSFetalbovineserum胎牛血清EGFEpitheliumgrowthfactor表皮生長因子EDTAEthylendiaminetetryacetica

4、cid乙二胺四乙酸PHPartiallyhepatectomized部分肝切除ECMExtracellularmatrix細胞外基質(zhì)DPPWDipeptidylpeptidaseIV二肽二酰酶ⅣDMSODimethylsulfoxide二甲基亞砜DABDiaminobezidine二氨基聯(lián)苯胺CK.19Cytokemtin19細胞角蛋白19BCIP5-bromo-4-chloro-3_indolyl-phosphate5一溴_4氯一3一吲哚一磷酸ALBAlbumin白蛋白AFPAlpha—fetoprotein甲胎球蛋白AAFN一2一acetylaminofluorene2

5、-乙酰氨基芴SCIDSeverecombinedimmunodeficient嚴重聯(lián)合免疫缺陷小鼠mice第1頁第四軍醫(yī)大學碩士學位論文大鼠胎肝前體細胞的生物學特性研究碩士研究生導師萬東君李六金教授(第四軍醫(yī)大學實驗動物中心710032),^摘要l肝臟疾病(如肝炎、肝硬化)在我國具有很高的發(fā)病率,這些疾病最終導致肝功能衰竭,如何治療肝功能衰竭目前仍然是肝病臨床的一大難題。雖然現(xiàn)在公認的最好的治療方式是肝移植,但是由于受到供體來源缺少的限制和移植后的免疫排斥反應,而不能廣泛應用。自70年代末發(fā)展起來的肝細胞移植技術(shù),具有許多優(yōu)點:一個供體可以給多個受體提供肝細胞,移植技術(shù)簡單

6、,即使移植失敗,對受體的影響也十分微小,因此受到越來越廣泛的重視。在眾多可供移植的細胞中,肝干細胞具有多向分化和增殖能力強的特點,其來源豐富,對于修復肝臟細胞、維持肝功能、治療肝臟疾病,以及研究肝臟的發(fā)育學均具有重要意義。目前認為具有肝干細胞特性的細胞有:肝/卵圓細胞、骨髓造血干細胞、胰腺前體細胞和胎肝前體細胞(HPFL)等。y研究目的:本實驗以大鼠EDl3.5d的HPFL為實驗材料,目的在于探索:1)肝干細胞的體外分離培養(yǎng)的特點;2)肝干細胞的體外多向分化;3)體外擴增的肝干細胞植入體內(nèi)的發(fā)育潛力;4)凍存復蘇對肝干細胞的生物學特性的影響。以便為臨床應用治療肝臟疾病莫定基

7、礎(chǔ)?!谎芯糠椒ǎ?)取EDl3.5d的大鼠胎肝,酶消化法離散細胞,用紅細胞裂褲液去除紅細胞,差速貼壁法去除其它細胞,接種于不同的基質(zhì)和培養(yǎng)液中,MTT法比較不同培養(yǎng)液和培養(yǎng)基質(zhì)對大鼠HPFL的體外生長影響。2)將初步純化的EDl3.5d的大鼠HPFL采用顯微法進行克隆培養(yǎng),免疫組化法第2頁第四軍醫(yī)大學碩士學位論文篩選ALB+CK一19一的克隆進行誘導培養(yǎng),觀察ALB+CK.19一的細胞分化趨勢。3)收集在原代大鼠成纖維細胞(PREF)飼養(yǎng)層上培養(yǎng)的原代HPFL,注入SCID鼠脾臟,觀察HPFL植入體內(nèi)的增殖發(fā)育情況

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