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1、大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介本試劑盒主要用于大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞的培養(yǎng)，包含大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Cat.No.IMT-CBM-3004）和F細(xì)胞（Cat.No.IMT-2001-1）兩個(gè)組份。大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基是即用型培養(yǎng)基，包含大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子，以及必需的氨基酸、維生素、糖類、無機(jī)離子、微量元素等成分。在IMMORTECH技術(shù)人員的標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，該細(xì)胞可持續(xù)傳50代，仍能保持良好的細(xì)胞活性和原代細(xì)胞分化狀態(tài)。產(chǎn)品貨號(hào)IMT-K1-3004產(chǎn)
2、品品牌IMMORTECH產(chǎn)品規(guī)格100mL大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10管F細(xì)胞產(chǎn)品用途本產(chǎn)品只適用于實(shí)驗(yàn)研究，不適用于診斷和治療。運(yùn)輸條件干冰運(yùn)輸儲(chǔ)存條件大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（2-8℃避光）;F細(xì)胞（液氮）使用方法本方法以T25cm2透氣細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例說明，如為其它規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)器皿，請(qǐng)相應(yīng)的增加或減少細(xì)胞培養(yǎng)基、胰酶等用量。大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞的初次分離：（1）復(fù)蘇凍存的F細(xì)胞，37℃水浴旋轉(zhuǎn)速溶，轉(zhuǎn)移入含有9mLPBS緩沖液（不含鈣鎂離子）的15mL離心管中，低速離心（1000rp
3、m，室溫）4min。（2）吸棄上清液，將F細(xì)胞重懸于1-2mL大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中形成單細(xì)胞懸液。（3）轉(zhuǎn)移到T25中，將培養(yǎng)基體積補(bǔ)至4-5mL，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，使F細(xì)胞均勻鋪在培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）貼壁5小時(shí)以上或過夜，確保F細(xì)胞貼壁量達(dá)70%T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶以上。(★若F細(xì)胞貼壁量不足70%T25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需按缺少的量補(bǔ)加新復(fù)蘇的F細(xì)胞，使F細(xì)胞貼壁量達(dá)70%T25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶以上，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。)（4）若有漂浮的F細(xì)胞，則更換新鮮大鼠原代膀胱
4、上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基；若沒有漂浮的F細(xì)胞，則無需更換。（5）將新分離的大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞重懸于1-2mL大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)移至已接種F細(xì)胞的培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基體積補(bǔ)至7mL，置于培養(yǎng)箱（37℃，5%CO2）培養(yǎng)。（6）24h后觀察，若有漂浮細(xì)胞，需更換新鮮大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。更換時(shí)，動(dòng)作輕柔，防止F細(xì)胞脫落飄起。深圳市永生原代細(xì)胞生物科技有限公司企業(yè)QQ：3169429558深圳市南山區(qū)高新北六道蘭光科技園A612電話：0755-26406001；0755-26924629銷售
5、郵箱：sales@immortech.com.cn大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞的換液：建議每隔2-3天更換新的大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。首先吸棄舊的培養(yǎng)基，用4mLPBS緩沖液輕輕潤洗1-2次，然后加入7mL新鮮的大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。F細(xì)胞的更換：建議每隔2-4天更換F細(xì)胞。（1）小心吸去培養(yǎng)基，4mLPBS緩沖液潤洗2次，加入0.6mL0.02%EDTA（PH7.2-7.4，細(xì)胞培養(yǎng)專用，不含鈣鎂離子，使用前37℃水浴復(fù)溫）。輕輕晃動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，使EDTA鋪滿整個(gè)細(xì)胞層后，輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶
6、使F細(xì)胞脫落，同時(shí)謹(jǐn)防大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞脫落。（2）去除脫落的F細(xì)胞后，用4mLPBS緩沖液輕輕潤洗3次，加入5-6mL大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。（3）復(fù)蘇新的F細(xì)胞，加入培養(yǎng)瓶繼續(xù)共培養(yǎng)。(★若大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞克隆較多，可適當(dāng)減少F細(xì)胞的用量。)（4）5h或過夜后觀察F細(xì)胞的貼壁情況，若有漂浮的F細(xì)胞，先更換新鮮大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基；再看整體細(xì)胞的融合度，若不足80%，需補(bǔ)加新的F細(xì)胞。大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞的消化傳代：若大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞融合度達(dá)80%，或者融合度不足80%但個(gè)
7、別大克隆發(fā)生擠出現(xiàn)象或老化趨勢(shì)，則需消化傳代。（1）吸去培養(yǎng)基，4mLPBS緩沖液潤洗2次，加入0.6mL0.02%EDTA（PH7.2-7.4，細(xì)胞培養(yǎng)專用，不含鈣鎂離子，使用前37℃水浴復(fù)溫），輕輕晃動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，使EDTA鋪滿整個(gè)細(xì)胞層后，輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶使F細(xì)胞脫落，同時(shí)謹(jǐn)防大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞脫落。（2）去除脫落的F細(xì)胞后，用4mLPBS緩沖液輕輕潤洗2次。（3）加入0.6mL0.05%胰酶-EDTA（PH7.2-7.4，細(xì)胞培養(yǎng)專用，不含鈣鎂離子，使用前37℃水浴復(fù)溫）。輕輕晃動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶
8、，使消化液鋪滿整個(gè)細(xì)胞層后，置于37℃孵育2-7min（視細(xì)胞貼壁能力而定）。當(dāng)90%大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞從培養(yǎng)瓶脫落后，加入1mL終止液（含10%血清的PBS緩沖液，使用前37℃水浴復(fù)溫）終止。（4）收集細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，加入4mLPBS緩沖液清洗培養(yǎng)瓶2次，將所有液體轉(zhuǎn)移至同一15mL離心管，低速離心（1000rpm，室溫）4min。（5）吸棄上清液，用1-2mL大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸大鼠原代膀胱上皮細(xì)胞并
