大腸癌、胃癌PTEN基因編碼蛋白表達(dá)及其相關(guān)因素的研究

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1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文大腸癌、胃癌PTEN基因編碼蛋白表達(dá)及其相關(guān)因素的研究姓名：李曉玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：辛彥2003.4.1中文摘要前言胃癌、大腸癌是消化道發(fā)病率很高的兩個(gè)惡性腫瘤，且發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的無限性和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是腫瘤的最重要特征，是胃癌、大腸癌治療失敗導(dǎo)致死亡的主要原因。而腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移受多種癌基因和抑癌基因的調(diào)控。PTEN是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，編碼一種具有蛋白磷酸酶和磷酸酯酶雙特異性功能的蛋白質(zhì)。其磷酸酯酶功能是使PIP3去磷酸化，而PIP3是胰島素和表皮生長(zhǎng)因

2、子等細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體在細(xì)胞內(nèi)的第二信使。FFEN通過降低PIP3水平，抑制AKT活性，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。PTEN的蛋白磷酸酶活性是使FAK去磷酸化，F(xiàn)AK是整合蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞周期進(jìn)展的關(guān)鍵分子，PTEN通過抑制FAK介導(dǎo)的細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及生長(zhǎng)，從而抑制腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。有研究顯示PTEN在大腸癌及胃癌中均有不同程度的表達(dá)降低或缺失。EGFR／erbB一1、HER2／erbB一2是I型RTKs成員，具有內(nèi)源性酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，這種激酶活性決定細(xì)胞多種生物學(xué)功能如細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、運(yùn)動(dòng)及生存等。EGFR家

3、族的主要信號(hào)傳導(dǎo)通道是Ras—raf—MAP—kinase通道，另一個(gè)重要通道是通過PI一3一Kinase和其下游的蛋白激酶Akt(PKB)通道。當(dāng)受體與高親和性的配體結(jié)合后，EGFR形成同二聚體或與EGFR家族其它成員形成異二聚體，導(dǎo)致內(nèi)源性酪氨酸蛋白激酶激活，酪氨酸自磷酸化，最終引起一系列反應(yīng)，將信息傳遞給細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子從而影響相關(guān)基因的功能。由于表皮生長(zhǎng)因子受體家族是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的中心環(huán)節(jié)，認(rèn)識(shí)到針對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)異常環(huán)節(jié)進(jìn)行治療的重要性及可行性。目前，一些針對(duì)1型受體酪氨酸激酶的靶向治療已應(yīng)用于臨床，因而確定癌組織酪氨酸激酶受體表

4、達(dá)及基因狀況，篩選適于該項(xiàng)治療的病例，實(shí)施個(gè)體化的治療顯得尤為重要。ECD是介導(dǎo)同質(zhì)細(xì)胞問黏附的一組跨膜糖蛋白，主要分布在上皮細(xì)胞，是建立與保持上皮細(xì)胞極性和細(xì)胞間緊密連接的關(guān)鍵分子。鈣粘蛋白表達(dá)增高，癌細(xì)胞間連接緊密，使癌細(xì)胞不易脫落轉(zhuǎn)移，當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或缺失時(shí)將使同型細(xì)胞無法相飄粘連，這有利于腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)島轉(zhuǎn)移。已有瓔究焱鼴ECD異常表達(dá)與霉癌的進(jìn)展有關(guān)。躁的觀察大腸癌P'IEN基因編碼蛋白產(chǎn)物表達(dá)以及EGFR、C—erbB一2蛋白表達(dá)及其基因擴(kuò)增狀態(tài)。眈較分析大腸癌PTEN蛋臼表達(dá)與EGFR、e—erbB一2表達(dá)的關(guān)系，探討基因

5、擴(kuò)增在預(yù)測(cè)大腸癌靶向治療的意義。另外對(duì)參與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的燕要細(xì)胞黏附因子ECD及PTEN蛋白在胃癌組鱖中表達(dá)的研究，探討其在胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用及與胃癌生物學(xué)行為和預(yù)后的關(guān)系，期望發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)指標(biāo)，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。方法收集122例大腸癌術(shù)詹病例資料及常規(guī)石臘包埋標(biāo)本，采用SABC方法檢測(cè)大腸癌緩織書PTEN、EGFR、C—erbB一2蛋盎懿表達(dá)。應(yīng)羆雙色標(biāo)記的FISH方法對(duì)EGFR、C—erbB一2免疫組化染色陽性的20例大腸癌標(biāo)本進(jìn)行基因擴(kuò)增檢測(cè)，隨撬選擇lO鍘溺性癍鍘傲為對(duì)照進(jìn)褥EGFR、C—erbB一2的

6、FISH分析。另收集100例外科手術(shù)切除胃癌石臘包埋標(biāo)本，采兵lSABC方法撿濺黌瘞韁織trrEN蛋龜及ECD的表達(dá)。絡(luò)果1．PIEN騷自在正常大腸粘膜上皮細(xì)胞中均呈陽性表達(dá)。癌細(xì)胞中表達(dá)部緞一簸褒纓貔核及纓脆核膜上，少數(shù)病爨闋時(shí)有纓胞漿瓣藤性表達(dá)，PTEN異常表達(dá)率為65．57％，其中表達(dá)下調(diào)率為58．20％，表達(dá)缺失率為7．38％。這靜異常表達(dá)與大腸癌縫緩學(xué)類型、Dukes分麓及淋遨結(jié)轉(zhuǎn)移密留相關(guān)(P<0．05)。2+在大腸癌韁織孛，EGFR蛋是可在綴慈漿及纓胞貘串表達(dá)，鬻餒表達(dá)率為44．26％，膜表達(dá)率為11．48％。多數(shù)陽性表

7、達(dá)的癌細(xì)胞常呈巢狀分布，EGFR表這與辨瘸組織挲類型密切耱關(guān)≤P<0。05)，僵與PTEN蛋自表達(dá)無密切相關(guān)關(guān)系(P>0．05)。而只有3例C—erbB一2呈陽性表達(dá)，陽性·2·率為2．46％。其中2例為高水平表達(dá)，且伴PTEN蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。3．對(duì)17例大腸癌IHC檢測(cè)EGFR呈膜表達(dá)及部分胞漿表達(dá)的病例進(jìn)行FISH分析，在僅有的一例IHC3+病人癌組織中，可見EGFR基因擴(kuò)增，且DM、HSR兩種不同形式的擴(kuò)增同時(shí)存在；9例IHC2+病例中，有兩例可見核內(nèi)多倍染色體信號(hào)，無基因擴(kuò)增。其余7例同正常粘膜上皮細(xì)胞，未見基因擴(kuò)增。另外，

8、對(duì)C—erbB一2免疫組化結(jié)果陽性的三例進(jìn)行FISH分析后，顯示強(qiáng)陽性表達(dá)的2例均呈HSR形式基因擴(kuò)增，IHCl+者無基因擴(kuò)增。4．PTEN蛋白、ECD在非癌胃黏膜中均呈陽性表達(dá)。胃癌組織中PTEN蛋白低于周圍正常胃黏膜