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《反義Survivin寡核苷酸逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、反義Survivin寡核普酸逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的研究(中文摘?jiǎng)駥?dǎo)師:衫芝蘭教授研究生:錢(qián)曉苦目的:本研究旨在探討Survivin基因在卵巢癌順鉑耐藥中的作用、機(jī)制以及與其他細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的關(guān)系，探索反義Survivin寡核昔酸對(duì)順鉑化療的增敏作用及其機(jī)理，探討Survivin基因作為腫瘤基因治療一個(gè)新的靶點(diǎn)的可行性。方法:1，采用反義Survivin寡核普酸轉(zhuǎn)染COCi/DDP細(xì)胞以及梯度濃度順鉑分別作用于COC1細(xì)胞和COC1/DDP細(xì)胞;2.采用免疫熒光標(biāo)記法、Westernblot和熒光定量RT-
2、PCR檢測(cè)梯度順鉑作用后兩種細(xì)胞株中SurvivinmRNA及蛋白表達(dá)的變化以及COC1/DDP轉(zhuǎn)染前后SurvivinmRNA及蛋白表達(dá)的變化;3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)梯度順鉑作用后兩種細(xì)胞株以及轉(zhuǎn)染前后COC1/DDP細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期的變化;4.三磷酸腺昔生物發(fā)光法檢測(cè)梯度順鉑作用后兩種細(xì)胞株的抑制率以及轉(zhuǎn)染后COC1/DDP細(xì)胞協(xié)同順鉑作用后的抑制率。5.酶活性試劑及Westernblot檢測(cè)不同濃度順鉑作用于COC1.COCl/DDP細(xì)胞及反義Survivin寡核營(yíng)酸作用耐藥細(xì)胞株COCl/DDP后casp
3、ase-3的表達(dá)和活性的變化6.采用免疫熒光標(biāo)記法、Westernblot和RT-PCR檢測(cè)COC1細(xì)胞和COCI/DDP細(xì)胞中P53,bcl-2表達(dá)的差異以及COC1/DDP轉(zhuǎn)染后表達(dá)的變化.結(jié)果:1.人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株COCI/DDP中Survivin的蛋白表達(dá)高于敏感細(xì)胞株COCl約2倍;同時(shí)隨順鉑濃度增高表現(xiàn)不同特點(diǎn)，COC1細(xì)胞順鉑作用后升高迅速為15.43，是作用前3倍，而COCI/DDP細(xì)胞升高平緩，幅度較低。2，大劑量順鉑作用于COC1和COCI/DDP細(xì)胞后，Survivin的蛋白表達(dá)和mR
4、NA均下降直至消失。3.反義Survivin寡核昔酸作用COCI/DDP細(xì)胞后Survivin蛋白表達(dá)被抑制約50%,SurvivinmRNA被抑制約8.9倍;4.COC1細(xì)胞和COCI/DDP細(xì)胞在不同濃度順鉑作用24小時(shí)后，隨著濃度的升高。調(diào)亡指數(shù)逐步升高;COCI細(xì)胞中S期和G2M期細(xì)胞所占的比例逐步下降，G.期細(xì)胞比例明顯增多，COC1/DDP細(xì)胞中以G.期細(xì)胞減少的比例最高，G2M期細(xì)胞所占比例明顯增高，S期細(xì)胞變化差異不大;COC1/DDP細(xì)胞轉(zhuǎn)染survivin反義寡核昔酸后，24小時(shí)凋亡為59.7
5、%,S期細(xì)胞比例明顯升高，由轉(zhuǎn)染前的40%上升至轉(zhuǎn)染后的50.8%,G2期由5.2%上升至9.6%，而G,期由54.8%下降至39.6%;5.梯度順鉑作用后，COC1和COCI/DDP細(xì)胞的抑制率逐步增高，以COCI細(xì)胞增高明顯，轉(zhuǎn)染協(xié)同0.1xPPC,0.5xPPC和I.Oxppc順鉑作用后COC1/DDP細(xì)胞株的抑制率分別為32.04%,41.6%和72.1，比COC1細(xì)胞在相同濃度順鉑作用后的抑制率27.2%.36.07%和48.09%明顯要高;6.卵巢癌coca細(xì)胞和COC1/DDP細(xì)胞在順鉑作用后，隨著
6、順鉑濃度的增加，caspase-3活性亦相應(yīng)增加，呈劑量依賴(lài)關(guān)系，COC1細(xì)胞caspase-3活性較COCl/DDP細(xì)胞增加明顯，以反義Survivin寡核昔酸封閉Survivin基因的表達(dá)可以導(dǎo)致COCl/DDP細(xì)胞Caspase-3的激活;7.COCI細(xì)胞中P53表達(dá)明顯高于COC1/DDP細(xì)胞，而bcl-2的表達(dá)明顯低于耐藥亞株COCI/DDP細(xì)胞。反義Survivin寡核昔酸作用COCI/DDP細(xì)胞24小時(shí)后，P53的表達(dá)先輕微下降然后稍微增高，而bcl-2出現(xiàn)了明顯下調(diào)。結(jié)論:Survivin基因在人
7、卵巢癌耐藥亞株COC1/DDP細(xì)胞耐藥機(jī)制中有著重要作用，通過(guò)抑制Caspase-3活性使細(xì)胞逃避凋亡產(chǎn)生耐藥，同時(shí)涉及到影響其他基因調(diào)控細(xì)胞凋亡等更為復(fù)雜的機(jī)制。Survivin基因的反義寡核昔酸可以抑制Survivin基因的表達(dá)，增加COCIIDDP細(xì)胞的凋亡，起到順鉑增敏的作用。1關(guān)鍵詞1卵巢癌;Survivin基因;反義治療;順鉑;耐藥AntisenseOligonucleotideTargetingSurvivinReversesCisplatin-Resistant-OvarianCancerCell
8、sTutor:介了Zhilanpeng:XiaoleiQianObjective:Thestudywasdesignedtoinvestigatethefunctionofthegenesurvivininthecisplatin-resistantandtherelationshipbetweengenesurvivinandothergenecorrelativeto
